非洲马瘟九血清型DISA-DIVA疫苗平台的研发及其应用价值

　　为解决非洲马瘟(AHS)传统减毒活疫苗(LAV)安全性差且无法区分感染与接种动物的问题，研究团队开发了基于基因组Segment 10缺失的Disabled Infectious Single Animal (DISA)-DIVA疫苗平台，成功构建覆盖所有9种血清型的疫苗候选株（DISA1-DISA9），配套DIVA PCR检测方法可有效区分野生毒株感染，为全球马病防控提供安全高效的新型疫苗解决方案。

　　

非洲马瘟（African Horse Sickness, AHS）是一种由媒介昆虫库蠓（Culicoides）传播的烈性马科动物传染病，其病原体非洲马瘟病毒（AHSV）属于呼肠孤病毒科（Sedoreoviridae）环状病毒属（Orbivirus），共有9个血清型，各型间交叉保护力微弱。在易感马群中死亡率高达95%，对非洲发展中国家造成巨大经济损失。更令人担忧的是，随着气候变迁和媒介分布扩展，已发现温带地区的本地库蠓可传播相近环状病毒（如蓝舌病病毒），使得AHS成为非洲以外地区的潜在威胁。若在发达国家爆发，不仅冲击马术产业经济，更将对休闲马主造成情感冲击。

当前使用的减毒活疫苗（Live-attenuated vaccine, LAV）存在明显缺陷：一方面毒力返祖风险难以消除，另一方面无法区分疫苗接种动物和自然感染动物（违背DIVA原则：Differentiating Infected from Vaccinated Animals）。这种局限性严重阻碍疫情监测和贸易流通。随着反向遗传学（reverse genetics）技术的发展，研制更安全、符合DIVA原则的新一代疫苗成为可能。

本研究基于反向遗传学技术，通过精准缺失AHSV基因组第10片段（Segment 10）的非必需区域，成功构建了丧失毒力但保留免疫原性的"Disabled Infectious Single Animal (DISA)"疫苗平台。通过置换编码血清型特异性外壳蛋白的第2和第6基因组片段，研发出覆盖全部9个血清型的AHS DISA-DIVA疫苗（命名为DISA1至DISA9）。采用多种in vitro方法系统验证了疫苗株的生物学特性，并配套开发了针对Segment 10缺失区域的DIVA PCR检测方法。

关键技术方法包括：1）基于反向遗传学技术的疫苗株构建；2）基因组片段置换实现多血清型覆盖；3）in vitro病毒特性验证体系；4）DIVA PCR检测方法的开发与验证。所有实验均以马科动物为最终目标宿主设计。

研究结果表明：

1. 1.

   疫苗平台构建成功：通过Segment 10特定缺失彻底消除病毒毒力，同时保留病毒复制能力和免疫原性

2. 2.

   多血清型疫苗获得：通过交换Segment 2和Segment 6成功获得9种血清型疫苗株

3. 3.

   安全性验证：DISA1-DISA9均无毒性，且无法通过媒介昆虫传播

4. 4.

   DIVA能力证实：配套PCR检测可准确区分野生毒株感染和疫苗接种

研究结论表明，DISA-DIVA疫苗平台解决了传统LAV疫苗的安全性和鉴别诊断难题。9种血清型疫苗株（DISA1-DISA9）均不具备毒力，无法通过媒介传播，且能与野生型AHSV有效区分。该疫苗平台现已准备进入马靶动物接种-攻毒实验阶段，以进一步验证其保护效力。这项研究为全球AHS防控提供了突破性技术方案，不仅有助于非洲 endemic 地区的疫情控制，更为非流行国家提供了应对潜在入侵的疫苗储备和技术支撑。