基于HPLC导向分离牡丹皮中新型单萜苷类化合物及其乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

　　本研究基于HPLC与SMART技术从牡丹皮中分离鉴定3个新型及17个已知单萜苷类化合物，通过ECD确定绝对构型，发现化合物2对AChE具有抑制活性（IC50=18.54±2.60 μM），化合物13展现显著DPPH自由基清除能力（IC50=9.04±2.33 μM），为天然产物开发提供新思路。

　　

牡丹（Paeonia × suffruticosa Andr）作为传统中药，其根皮（牡丹皮）具有清热凉血、活血化瘀等功效，被广泛应用于中医临床。现代研究表明，牡丹皮中含有丰富的单萜类、酚类及黄酮类化合物，这些成分可能具有抗炎、抗氧化、神经保护等多种生物活性。然而，目前对牡丹皮中单萜苷类化合物的系统研究仍相对缺乏，尤其是其乙酰胆碱酯酶抑制活性和抗氧化潜力的深入探索，这对于开发治疗神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）的新型天然药物具有重要意义。乙酰胆碱酯酶（AChE）是治疗阿尔茨海默病的关键靶点，而氧化应激也被认为是该病发生发展的重要因素。因此，从牡丹皮中发掘具有AChE抑制和抗氧化活性的天然化合物，不仅有助于理解其传统药效的物质基础，也为创新药物研发提供了候选分子。

本研究采用高效液相色谱（HPLC）导向分离技术，结合小分子精确识别技术（SMART），对牡丹皮干燥根皮中的化学成分进行了系统研究。通过多种色谱方法（包括正相、反相及制备型HPLC）从样品中分离纯化化合物，并利用核磁共振（NMR）、质谱（MS）等光谱技术进行结构鉴定。绝对构型通过计算电子圆二色谱（ECD）与实验数据对比确定。活性方面，采用体外酶抑制实验评估化合物对AChE的抑制活性，并以DPPH自由基清除实验测试抗氧化能力。

研究结果如下：

1. 1.

   化合物分离与鉴定：从牡丹皮中分离得到20个单萜苷类化合物，包括3个新化合物（1-3）和17个已知类似物（4-20）。新化合物的结构通过一维/二维NMR及高分辨率质谱（HR-MS）解析，并经过ECD计算证实其绝对构型。

2. 2.

   乙酰胆碱酯酶抑制活性：化合物2表现出中度的AChE抑制活性，其IC₅₀值为18.54 ± 2.60 μM，提示该化合物可能作为AChE抑制剂的先导结构，用于抗阿尔茨海默病药物开发。

3. 3.

   抗氧化活性：化合物13显示出显著的DPPH自由基清除能力，IC₅₀值为9.04 ± 2.33 μM，表明其具有较强的抗氧化潜力，可能有助于缓解氧化应激相关疾病。

本研究首次从牡丹皮中分离得到多个单萜苷类化合物，并揭示了部分化合物的生物活性。化合物2的AChE抑制活性和化合物13的抗氧化活性为牡丹皮的药用价值提供了新的科学依据，不仅拓展了对牡丹皮化学成分和药理作用的认识，也为基于天然产物的神经保护剂和抗氧化剂研发提供了候选分子。这些发现对于推动中药现代化和天然药物开发具有重要参考价值，未来可进一步开展体内实验和机制研究，以验证其治疗潜力。该研究发表于《Fitoterapia》，凸显了其在天然产物研究领域的学术贡献。