LncRNA DEPDC1-AS1通过调控miR-508-3p/SQSTM1轴驱动子宫内膜癌进展的机制研究

　　本研究针对子宫内膜癌（EC）缺乏可靠预后标志物和治疗靶点的问题，开展了LncRNA DEPDC1-AS1调控机制的主题研究。通过临床样本分析、细胞功能实验和分子机制验证，发现DEPDC1-AS1通过吸附miR-508-3p上调SQSTM1表达，从而促进EC细胞增殖、迁移和侵袭。该研究为EC提供了新的预后生物标志物和潜在治疗靶点，具有重要的临床意义。

　　

子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma, EC）作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈现持续上升趋势，严重威胁女性健康。根据世界卫生组织2020年分类标准，子宫内膜增生特别是非典型增生（Atypical Hyperplasia, AH）具有较高的癌变风险，约25%未治疗的AH病例会进展为子宫内膜癌。尽管多数EC患者诊断时处于早期阶段，预后相对较好，但晚期或发生转移的患者治疗效果差，预后不佳。因此，寻找可靠的生物标志物用于评估EC的临床病理特征和复发风险，对改善诊断、预测预后以及提高患者长期生存率至关重要。

长链非编码RNA（long non-coding RNAs, lncRNAs）是一类不具备蛋白质编码能力的RNA分子，近年来被发现在多种癌症中发挥重要调控作用。它们通过多种机制调节基因表达，其中与微小RNA（microRNAs, miRNAs）的调控关系备受关注。lncRNAs可作为竞争性内源RNA（ceRNA），像"分子海绵"一样吸附miRNA，减弱miRNA对靶基因的抑制作用。DEPDC1-AS1是一个新发现的lncRNA，位于染色体1p31.3区域，在肺腺癌、卵巢癌和胃癌等多种恶性肿瘤中被认为是潜在的生物标志物。通过机器学习方法分析，DEPDC1-AS1被预测为EC的候选生物标志物，TCGA数据集分析也显示其在肿瘤组织中显著高表达，且与患者不良预后相关。然而，DEPDC1-AS1在EC中的具体生物学功能和机制尚不清楚。

值得注意的是，生物信息学预测发现DEPDC1-AS1含有miR-508-3p的潜在结合位点，表明两者可能存在调控关系。已有研究证明，在宫颈癌中miR-508-3p被Linc00483吸附调控其发展。这提出了一个假设：DEPDC1-AS1可能通过调控miR-508-3p轴促进EC进展，这一可能性需要进一步的实验验证。

本研究旨在探讨DEPDC1-AS1及其调控轴在EC中的作用，通过分析DEPDC1-AS1/miR-508-3p的表达谱和在细胞系中进行功能实验，增强对EC发病分子机制的理解，并为开发靶向治疗策略提供依据。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：收集100例子宫内膜增生和100例EC患者的临床样本进行回顾性研究；使用qRT-PCR技术定量检测DEPDC1-AS1、miR-508-3p和SQSTM1的表达水平；通过Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析预后因素；采用CCK-8法评估细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力；利用生物信息学预测调控相互作用，并通过双荧光素酶报告基因实验和共转染实验进行验证。

3.1 DEPDC1-AS1的异常表达及其与预后的关联

研究发现DEPDC1-AS1在EC组织中的表达显著上调，与增生组织相比增加了约40%。DEPDC1-AS1被确定为独立风险因素和预后因素，其高表达与晚期FIGO分期和宫颈浸润显著相关。生存分析显示，高DEPDC1-AS1表达患者5年生存率较低。在EC细胞系中，DEPDC1-AS1表达也普遍升高，其中AN3CA和Ishikawa细胞系表达最高，因此被选为后续实验对象。

3.2 下调DEPDC1-AS1抑制EC细胞增殖、迁移和侵袭

为探究DEPDC1-AS1在EC中的功能作用，研究人员使用shRNA敲低其表达，qRT-PCR证实敲低效率超过50%。功能实验表明，敲低DEPDC1-AS1显著抑制了AN3CA和Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭能力。亚细胞分级分析显示DEPDC1-AS1主要定位于细胞质，表明其可能参与转录后调控。KEGG通路分析发现与DEPDC1-AS1共表达的基因显著富集于细胞衰老、细胞周期和p53信号通路等与细胞生长和死亡相关的通路。

3.3 DEPDC1-AS1作为miR-508-3p的分子海绵

通过生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证，发现DEPDC1-AS1直接靶向结合miR-508-3p。miR-508-3p在EC组织和细胞系中表达显著降低，且与DEPDC1-AS1表达呈负相关。敲低DEPDC1-AS1后，miR-508-3p表达水平上升，进一步证实了两者之间的调控关系。

3.4 DEPDC1-AS1通过调控miR-508-3p调节EC细胞行为

过表达DEPDC1-AS1可显著增强EC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，同时抑制miR-508-3p表达。而转染miR-508-3p模拟物则抑制这些细胞活动。共转染实验表明，同时过表达DEPDC1-AS1和miR-508-3p模拟物可部分逆转miR-508-3p单独产生的抑制效果，证明DEPDC1-AS1至少部分通过抑制miR-508-3p发挥其致癌功能。

3.5 SQSTM1是miR-508-3p的直接靶标

生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验证实SQSTM1是miR-508-3p的直接靶标。SQSTM1在EC组织中表达显著升高，其表达模式与DEPDC1-AS1相似。相关性分析显示SQSTM1与miR-508-3p表达呈负相关，与DEPDC1-AS1表达呈正相关。

研究结论与讨论部分指出，本研究首次报道DEPDC1-AS1在EC中显著过表达且与不良预后相关。DEPDC1-AS1通过吸附miR-508-3p解除其对SQSTM1的抑制，从而促进EC进展。这一发现表明DEPDC1-AS1/miR-508-3p/SQSTM1轴在EC发展中起关键作用，为EC提供了潜在的预后生物标志物和治疗靶点。

SQSTM1作为一种自噬适配蛋白，在自噬过程中引导泛素化蛋白和受损细胞器到自噬体进行降解，参与选择性自噬。当自噬活性受损时，SQSTM1在细胞内积累，成为自噬阻断的标志。本研究中肿瘤组织SQSTM1表达升高，提示可能存在自噬失调，促进EC发展。先前研究表明，外源性小分子化合物或天然提取物抑制EC进展时伴随SQSTM1表达下降、LC3-II/LC3-I比率增加以及PI3K/Akt/mTOR通路抑制，暗示SQSTM1可能通过调节经典自噬通路或其他信号通路（如PI3K/AKT）影响EC进展，但这一假设在本研究中未得到验证，需要进一步研究。

细胞周期失调是EC发展的主要驱动因素，通常表现为增殖信号通路（如PI3K/AKT）过度激活、细胞周期蛋白（如Cyclin D1和Cyclin E）过表达以及CDK抑制剂（包括p16、p21和p27）和p53等肿瘤抑制因子失活。这些改变损害了关键的细胞周期检查点——特别是G1/S转换，导致不受控制的增殖、凋逃避免和基因组不稳定性积累。p53在DNA损伤应答、细胞周期阻滞、凋亡诱导、DNA修复和血管生成抑制中起关键作用，这些功能与肿瘤侵袭性密切相关。本研究中，与DEPDC1-AS1共表达的基因富集分析显示其在癌症相关通路中富集，包括细胞周期和p53信号通路。虽然目前缺乏DEPDC1-AS1与这些通路直接相关的实验证据，但这种关联性值得进一步研究。

该研究的局限性包括：主要关注DEPDC1-AS1的下游调控效应，其上游调控机制尚不清楚；虽然双荧光素酶实验证实了DEPDC1-AS1与miR-508-3p的直接相互作用，但未进行RNA pull-down实验结合质谱分析鉴定其他RNA结合蛋白或协同调控RNA；所有机制研究均在体外进行，DEPDC1-AS1敲低和miR-508-3p模拟物的抗肿瘤效果尚未在体内验证。未来研究需要整合体内外方法阐明DEPDC1-AS1在EC进展中的完整生物学作用。

总之，这项研究首次报道DEPDC1-AS1在EC中显著过表达且与不良预后相关，并通过调控miR-508-3p加重EC进展。这些发现表明DEPDC1-AS1作为潜在的治疗和预后靶点，为未来EC临床研究和药物开发提供了有价值的见解和理论基础。该研究成果发表在《Discover Oncology》期刊，为子宫内膜癌的分子机制研究和精准治疗提供了重要科学依据。