LncRNA B4GALT1-AS1/miR-144-3p轴通过调控PD-L1表达抑制肺腺癌CD8+ T细胞毒性：免疫治疗新靶点的发现

　　本研究针对肺腺癌（LUAD）免疫治疗响应有限的难题，揭示了lncRNA B4GALT1-AS1通过海绵吸附miR-144-3p上调PD-L1表达，进而抑制CD8+ T细胞毒性并促进肿瘤免疫逃逸的新机制。该发现为LUAD的免疫治疗策略创新提供了重要理论依据。

　　

肺腺癌（LUAD）作为非小细胞肺癌（NSCLC）中最常见的亚型，是全球癌症相关死亡的主要原因之一。尽管免疫检查点抑制剂（ICIs）的出现为部分患者带来了长期临床获益，但多数LUAD患者对现有免疫治疗响应有限，肿瘤免疫逃逸机制仍是制约疗效的关键瓶颈。程序性死亡配体1（PD-L1）与T细胞表面的PD-1结合可抑制T细胞活性，是免疫逃逸的重要介质，但其在LUAD中的调控网络尚未完全阐明。长链非编码RNA（lncRNA）作为竞争性内源RNA（ceRNA）通过吸附微小RNA（miRNA）参与肿瘤进展和免疫调节，已成为癌症研究的新焦点。

在此背景下，黄等人发表于《Discover Oncology》的研究深入探讨了lncRNA B4GALT1-AS1在LUAD免疫逃逸中的作用机制。研究人员通过生物信息学分析发现B4GALT1-AS1在LUAD组织中显著高表达，而miR-144-3p则低表达。进一步实验证实B4GALT1-AS1可直接结合miR-144-3p，解除其对PD-L1的抑制，从而促进肿瘤细胞增殖、迁移并削弱CD8⁺ T细胞的杀伤功能。这一轴的发现不仅揭示了LUAD免疫抑制微环境形成的新机制，也为开发靶向lncRNA的免疫治疗策略提供了潜在靶点。

本研究主要采用以下关键技术方法：通过TCGA数据库和生物信息学工具（DIANA-LncBase、FreiburgRNATool）分析基因表达与结合位点；利用RNA免疫沉淀（RIP）、双荧光素酶报告基因和RNA pull-down实验验证RNA间相互作用；通过细胞转染、qRT-PCR和Western blot检测分子表达；采用集落形成、Transwell和流式细胞术评估细胞增殖、迁移、侵袭与周期分布；建立CD8⁺ T细胞与LUAD细胞共培养系统，通过LDH释放试验、ELISA和流式细胞术分析T细胞毒性及细胞因子分泌。

3.1 B4GALT1-AS1在LUAD细胞中高表达

通过qRT-PCR检测发现，B4GALT1-AS1在多种LUAD细胞系（NCI-H1792、PC-9、NCI-H441、NCI-H1975）中的表达显著高于正常支气管上皮细胞（BEAS-2B），证实其在LUAD中异常高表达。

3.2 B4GALT1-AS1促进LUAD细胞增殖、迁移与免疫逃逸

过表达B4GALT1-AS1可显著增强LUAD细胞增殖、迁移和侵袭能力，并上调PD-L1蛋白表达；沉默B4GALT1-AS1则抑制这些恶性表型。流式细胞术显示过表达B4GALT1-AS1减少G0/G1期细胞比例，促进细胞周期进展。在共培养实验中，过表达B4GALT1-AS1降低CD8⁺ T细胞中IFN-γ和TNF-α阳性比例，削弱其细胞毒性并抑制细胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL-2）分泌，表明其促进免疫逃逸。

3.3 B4GALT1-AS1海绵吸附miR-144-3p

生物信息学预测及实验验证（RIP、双荧光素酶报告基因、RNA pull-down）证实B4GALT1-AS1与miR-144-3p存在直接结合位点。TCGA数据分析显示miR-144-3p在LUAD组织中低表达，细胞实验进一步验证其在LUAD细胞系中表达下调。

3.4 B4GALT1-AS1/miR-144-3p轴通过调控PD-L1抑制CD8⁺ T细胞毒性

救援实验表明，过表达miR-144-3p可逆转B4GALT1-AS1对PD-L1的上调作用，抑制LUAD细胞增殖、迁移和侵袭，并恢复CD8⁺ T细胞的细胞毒性和细胞因子分泌能力。证实B4GALT1-AS1通过海绵吸附miR-144-3p解除其对PD-L1的抑制，从而促进免疫逃逸。

本研究系统阐明了B4GALT1-AS1/miR-144-3p/PD-L1轴在LUAD免疫逃逸中的关键作用。B4GALT1-AS1通过吸附miR-144-3p解除其对PD-L1的转录抑制，进而抑制CD8⁺ T细胞的细胞毒功能，促进肿瘤进展。该机制不仅丰富了LUAD免疫微环境的调控网络，也为开发靶向lncRNA的联合免疫疗法提供了新思路。尽管研究未涉及临床样本验证及miR-144-3p下游靶标的完整探索，但其揭示的ceRNA调控模式为克服免疫治疗耐药性提供了潜在干预策略，具有重要的转化医学价值。