5-FU诱导分泌型AZGP1通过结合PD-L1促进胆管癌细胞凋亡的机制与免疫调控意义

　　本研究针对胆管癌（CCA）治疗选择有限、临床预后差的难题，揭示了5-氟尿嘧啶（5-FU）通过调控AKT-Foxo1信号通路上调可溶性AZGP1（sAZGP1）的表达，并首次发现sAZGP1可直接结合PD-L1，诱导癌细胞凋亡并激活免疫细胞。该发现为CCA治疗提供了新型预测标志物和免疫治疗新靶点，对推进精准治疗策略具有重要意义。

　　

胆管癌（Cholangiocarcinoma, CCA）是一种起源于胆管上皮的高度恶性肿瘤，因其解剖位置特殊、早期诊断困难且易复发转移，患者预后极差。目前临床治疗以手术切除为主，但多数患者确诊时已失去手术机会。化疗方案如5-氟尿嘧啶（5-FU）或吉西他滨虽广泛应用，但响应率低且缺乏有效预测标志物，成为临床治疗的瓶颈。与此同时，免疫检查点分子PD-L1在多种肿瘤中高表达，介导免疫逃逸，但其在CCA中的肿瘤细胞内在功能尚不明确。因此，探寻新的生物标志物及治疗靶点，揭示化疗与免疫微环境的交互机制，是改善CCA治疗现状的迫切需求。

在该背景下，You等人在《Molecular Medicine》发表的研究，系统探讨了5-FU诱导分泌蛋白AZGP1在调控CCA细胞死亡及免疫微环境中的作用机制。研究综合运用了细胞系培养与基因操作（如过表达与shRNA敲低）、蛋白质免疫印迹（Western blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫共沉淀（Co-IP）、免疫荧光（IF）、流式细胞术（FACS）、小鼠CCA模型构建及组织免疫组化（IHC）等关键技术方法，其中人CCA细胞株及小鼠模型为体内外功能验证提供了基础，人外周血单核细胞（PBMCs）来源于健康供体。

Soluble AZGP1 facilitates the cell death of CCA cells

研究人员发现，在多种人CCA细胞系中过表达AZGP1可促进细胞死亡，并检测到其分泌形式sAZGP1的表达升高。通过浓度梯度处理条件培养基（CM），证实sAZGP1以浓度依赖性方式诱导细胞死亡，伴随凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的上调。

In the CCA mouse model, the expression of sAZGP1 is significantly reduced

通过手术构建CCA小鼠模型，观察到模型组血浆sAZGP1水平显著低于健康对照组，而肿瘤标志物CA19-9和增殖指标Ki-67表达升高，提示sAZGP1的下调与CCA恶性进展相关。

The upregulation of Foxo1 influences the transcription and secretion of AZGP1

5-FU处理可时间依赖性地降低p-AKT与p-Foxo1水平，促进Foxo1核转位，进而激活AZGP1转录与表达。Foxo1过表达实验进一步验证其对AZGP1 mRNA和蛋白水平的正向调控。

PD-L1 functions as a significant interaction partner of sAZGP1

通过蛋白互作网络与Co-IP实验，发现sAZGP1与膜型PD-L1直接结合，且结合区域位于PD-L1胞外结构域（Domain 1）。AZGP1过表达还可上调膜PD-L1表达。

The inhibition of sAZGP1 and PD-L1 results in the attenuation of cell death in CCA cells

敲低AZGP1或PD-L1均可逆转5-FU或sAZGP1条件培养基诱导的细胞死亡，并抑制AKT磷酸化与caspase-3活化，证实sAZGP1-PD-L1互作通过调控AKT信号促进凋亡。

sAZGP1 influences T-cell activation within the microenvironment of CCA

重组AZGP1处理可显著激活PBMCs中CD4⁺ T细胞，且在PD-L1高表达CCA细胞中诱导更强凋亡效应，提示sAZGP1兼具直接促凋亡与免疫激活的双重功能。

本研究系统阐明了5-FU通过AKT-Foxo1轴诱导sAZGP1分泌，后者通过结合PD-L1并抑制AKT信号通路促进CCA细胞凋亡，同时激活CD4⁺ T细胞免疫应答。这一发现不仅揭示了sAZGP1作为5-FU疗效预测标志物的潜力，还为联合免疫治疗提供了新靶点，对改善CCA患者预后及开发精准治疗策略具有重要意义。