Linc01271通过miR-149-3p/RAB35轴调控脂质合成与MASLD/MASH进展的机制研究

　　本研究针对代谢相关脂肪性肝炎（MASH）的分子机制展开探索，发现长链非编码RNA Linc01271在MASH组织中显著上调，并通过ceRNA机制吸附miR-149-3p，解除其对RAB35的抑制，进而激活PI3K/AKT/mTOR信号通路，促进脂质合成和炎症反应。该研究揭示了Linc01271作为MASH进展的关键调控因子，为临床治疗提供了新的潜在靶点。

　　

代谢相关脂肪性肝炎（MASH）是代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）的严重形式，以肝细胞损伤、炎症和纤维化为特征。随着全球肥胖和糖尿病发病率的上升，MASH已成为重要的公共卫生问题，但其发病机制尚未完全阐明，缺乏有效治疗靶点。脂质代谢异常和慢性炎症是MASH的核心环节，长链非编码RNA（lncRNA）作为关键调控分子，在多种疾病中发挥重要作用，但其在MASH中的具体机制仍需深入探索。

本研究通过转录组测序和RT-qPCR（逆转录定量实时聚合酶链反应）发现，Linc01271在MASH组织和脂毒性细胞模型中显著上调。功能实验表明，敲低Linc01271可减少脂滴形成、降低甘油三酯（TG）和胆固醇（TC）水平，并下调脂代谢相关基因（CD36、ACC1、FASN）和炎症因子（IL-6、IL-8、TGF-β1）；而过表达Linc01271则产生相反效应。机制上，Linc01271作为竞争性内源RNA（ceRNA）吸附miR-149-3p，解除其对RAB35的抑制，从而激活PI3K/AKT/mTOR通路，促进脂质合成和炎症反应。动物实验进一步证实，肝特异性过表达Linc01271加剧了小鼠MASH模型的肝损伤和代谢紊乱。

研究主要采用了临床样本分析（12例MASH和12例正常肝组织）、转录组测序、细胞模型（THLE-2细胞脂毒性模型及原代肝细胞、肝星状细胞、库普弗细胞分离培养）、动物模型（C57BL/C小鼠高脂高胆固醇饮食诱导MASLD/MASH）、荧光原位杂交（FISH）、双荧光素酶报告实验、腺相关病毒（AAV）介导的基因过表达/敲低、Western blot、油红O染色和脂质定量等关键技术方法。

Linc01271在MASLD/MASH组织中上调并与疾病进展相关

转录组测序和RT-qPCR结果显示，Linc01271在MASH患者肝组织和脂毒性THLE-2细胞中表达显著升高，且在HFHC（高脂高胆固醇）饮食小鼠模型中随疾病进展（从MASLD到MASH）进一步上调。FISH实验证实Linc01271主要定位于细胞核。

Linc01271调控脂质代谢和炎症反应

敲低Linc01271减少脂滴积累、降低TG/TC水平，并下调脂代谢基因和炎症因子表达；而过表达Linc01271则促进脂质合成和炎症反应。共培养实验表明，Linc01271过表达的肝细胞可通过旁分泌信号激活肝星状细胞（HSCs），上调α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白）和Collagen I（胶原蛋白I）表达。

Linc01271通过体内实验促进MASH进展

AAV介导的肝特异性过表达Linc01271加剧HFHC饮食小鼠的肝重/体重比、血糖升高、肝损伤标志物（ALT/AST）及血脂水平，并上调脂代谢和炎症相关基因表达。

Linc01271作为ceRNA吸附miR-149-3p并调控RAB35

生物信息学分析和双荧光素酶实验证实，Linc01271直接结合miR-149-3p，而miR-149-3p靶向抑制RAB35 mRNA的多个位点（588-595 bp和1332-1339 bp）。Linc01271通过解除miR-149-3p对RAB35的抑制，正向调控RAB35表达。

Linc01271通过miR-149-3p/RAB35轴激活PI3K/AKT/mTOR通路

Western blot显示，Linc01271过表达促进PI3K、AKT和mTOR磷酸化，而敲低RAB35或使用AKT抑制剂MK-2206可逆转该效应。救援实验证实，RAB35过表达可抵消miR-149-3p对PI3K/AKT/mTOR通路的抑制。

救援实验验证Linc01271通过RAB35促进脂质合成

在Linc01271敲低细胞中过表达RAB35，可部分恢复脂质积累、脂代谢基因和炎症因子表达，证实RAB35是Linc01271功能的下游效应分子。

研究结论表明，Linc01271通过吸附miR-149-3p解除对RAB35的抑制，激活PI3K/AKT/mTOR通路，驱动肝细胞脂质合成和炎症反应，并通过旁分泌信号促进HSC活化和纤维化。该研究不仅揭示了Linc01271/miR-149-3p/RAB35轴在MASH中的核心作用，还为开发靶向Linc01271的治疗策略提供了理论基础。未来研究需进一步探索Linc01271在临床样本中的表达模式及其作为生物标志物或治疗靶点的潜力。