基于LC-MS与蛋白质组学揭示左归丸治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的MAPK信号通路机制

　　本研究针对多囊卵巢综合征(PCOS)的治疗机制难题，通过LC-MS鉴定左归丸(ZGP)的31种活性成分，结合4D-DIA蛋白质组学与网络药理学分析，发现ZGP通过调控MAPK信号通路（抑制p-ERK1/2与p-JNK磷酸化）改善PCOS大鼠的激素紊乱与卵巢损伤，为中药治疗PCOS提供分子机制依据。

　　

多囊卵巢综合征（PCOS）是困扰育龄女性的常见内分泌代谢疾病，全球发病率高达8%-13%。患者不仅面临月经紊乱、不孕等问题，还常伴随肥胖、胰岛素抵抗（IR）等代谢异常。当前主流药物如二甲双胍虽能改善部分症状，但腹泻等副作用限制了其长期应用。传统中药左归丸（ZGP）在临床中常用于改善生殖系统功能，但其治疗PCOS的具体机制尚未明确。

为揭示ZGP的作用机制，Ke Yuxuan等研究人员整合了液质联用技术（LC-MS）、4D-DIA蛋白质组学、网络药理学及动物实验等多维度技术手段。首先通过LC-MS从ZGP中鉴定出31种活性成分（以槲皮素、山奈酚为代表），并利用网络药理学筛选出402个ZGP与PCOS的共同作用靶点。随后通过构建letrozole联合高脂饮食诱导的PCOS大鼠模型，验证ZGP对肥胖、卵巢多囊样变及血清激素（降低T、AMH，调节FSH/LH）的改善作用。蛋白质组学分析进一步发现ZGP逆转了354个差异表达蛋白，其中MAPK信号通路被确定为关键通路。Western blot结果证实ZGP显著抑制了p-ERK1/2和p-JNK的异常磷酸化。

主要技术方法

研究采用LC-MS鉴定ZGP化学成分；通过letrozole灌胃联合高脂饮食构建PCOS大鼠模型；使用ELISA检测血清激素（FSH、LH、E₂、AMH、T）；采用4D-DIA蛋白质组学分析卵巢组织差异蛋白；结合网络药理学筛选核心靶点与通路；Western blot验证MAPK通路关键蛋白表达。

研究结果

1. 1.
   ZGP活性成分与靶点预测
   LC-MS分析鉴定出ZGP中301种成分，经数据库筛选确定31个活性成分（如槲皮素、山奈酚），对应602个作用靶点。与PCOS疾病靶点交集后获得402个共同靶点，PPI网络分析核心靶点为AKT1、TP53、TNF等。分子 docking 显示核心成分与靶点结合稳定（结合能<-5 kcal/mol）。
2. 2.
   ZGP改善PCOS大鼠表型与激素水平
   与模型组相比，ZGP显著降低大鼠体重（P<0.05），减少卵巢囊状卵泡数量（P<0.01），增加黄体计数（P<0.05）。ELISA检测显示ZGP降低睾酮（T）（P<0.0001）和抗缪勒管激素（AMH）水平（P<0.01），调节FSH/LH比值。
3. 3.
   蛋白质组学与通路验证
   4D-DIA分析发现ZGP逆转354个差异蛋白的表达，KEGG富集提示MAPK通路为核心机制。Western blot证实ZGP下调p-ERK1/2和p-JNK的磷酸化水平（P<0.05），而对p38 MAPK影响不显著。

结论与意义

本研究首次通过多组学整合策略揭示ZGP通过MAPK信号通路（尤其是ERK1/2和JNK亚通路）改善PCOS的分子机制。这不仅为中药复方治疗内分泌疾病提供了科学依据，也为开发针对PCOS的靶向疗法提供了新思路。研究成果发表于《Journal of Ovarian Research》，彰显了传统中药现代化研究的价值。