基于ITS2序列等位基因特异性PCR技术精准鉴定北五味子种子及排除常见掺伪物

　　本研究针对药材市场及种源中华中五味子常被误作北五味子使用的难题，开发了基于ITS2序列的等位基因特异性PCR方法。通过构建NJ系统树筛选SNP位点，设计特异性引物，实现北五味子种子273?bp条带专属扩增，灵敏度达0.5?ng基因组DNA。该方法为药材种源质量控制提供了高效精准的技术支撑。

　　

在中药材市场和种源流通领域，华中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.）常被冒充为药用价值更高的北五味子（Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.）。虽然《中国药典》在药材层面已作出区分，但种子阶段缺乏可靠鉴定方法，传统形态学鉴定高度依赖经验。

为从源头上实现质量控制，研究人员基于ITS2（Internal Transcribed Spacer 2）序列构建邻接树（Neighbor-joining tree），分析物种遗传关系并筛选出北五味子的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点。针对该位点设计等位基因特异性PCR（Allele-specific PCR）引物，建立鉴定体系。实验表明：北五味子种子能特异性扩增出273?bp条带，且无交叉反应；体系灵敏度极高，可检测低至0.5?ng的基因组DNA。经商业化样品验证，该方法具备准确性、重现性和实用价值。

该技术为北五味子种子的大规模认证提供了高效、精确且操作简便的理想工具，不仅保障了种植源头的种子纯度，更有助于推动珍贵药材全产业链的标准化生产。