基于富集肉汤法优化直肠拭子筛查显著提升ESBL、碳青霉烯酶及VRE检测灵敏度

　　本研究针对临床MDR细菌筛查灵敏度不足的问题，通过优化富集肉汤法对直肠拭子样本中的ESBL生产者、碳青霉烯酶生产者(CPO)和VRE进行检测。结果显示，相较于直接培养法，富集策略使CPO检出率提升58.8%，ESBL和VRE检出率均提高20%，为医院感染控制和暴发管理提供了高精度筛查方案。

　　

在全球公共卫生领域，多重耐药菌（Multidrug-resistant, MDR）的蔓延已成为严峻挑战。由于有效治疗手段匮乏，MDR细菌感染显著推高了发病率和死亡率。早期发现患者体内定植的MDR细菌，对于及时实施感染控制措施、预防医院内暴发流行至关重要。然而，目前临床上对于MDR细菌 colonization（定植）的最佳筛查策略仍存在争议，尤其是在如何平衡检测灵敏度、操作便捷性和时间成本方面。

许多医疗机构已将MDR细菌筛查纳入常规感控流程，重点关注三大类耐药菌：产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-Lactamase, ESBL）肠杆菌科细菌、碳青霉烯酶产生菌（Carbapenemase-producing Organisms, CPO）以及万古霉素耐药肠球菌（Vancomycin-Resistant Enterococci, VRE）。传统方法多采用直接接种于显色培养基或含药培养基的方式，虽具一定敏感性和特异性，但对于低载量菌株的检出能力有限。富集肉汤可通过在接种前促进目标菌株选择性增殖，提升低丰度菌群的检出率。尽管在暴发调查和实验研究中富集法已被证明有效，但其在常规临床筛查、尤其是同时覆盖三大类MDR细菌的实际应用价值，尚缺乏系统评估。

在这一背景下，由Dominique S Blanc领衔的研究团队在《European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases》发表了一项研究，致力于将优化后的富集肉汤方案整合进医院常规筛查流程，系统评估其对VRE、ESBL和CPO检测灵敏度的提升效果。该研究是团队前期体外实验的延续，首次在大规模前瞻性临床样本中验证了富集方法的可行性与优越性。

本研究采用前瞻性设计，在2023年8月至2024年3月期间，收集瑞士洛桑大学医院（Lausanne University Hospital）送检的大部分直肠拭子样本。样本采集使用含1毫升Amies转运培养基的拭子（eSwab, Copan）。关键技术方法包括：一、直接接种于多种选择性显色培养基（VRE Brilliance，BSLE CHROMagar，SuperCARBA CHROMagar）；二、平行接种0.25 mL样本至优化配方的富集肉汤（含抗生素的胰蛋白酶大豆肉汤，TSB）；三、细菌鉴定采用MALDI-TOF质谱；四、耐药机制确认使用NG CTX-M Multi检测、NG CARBA检测、GeneXpert vanA/vanB基因检测及表型药敏协同试验。

研究结果如下：

VRE筛查：

研究共检出vanA型屎肠球菌为优势菌株，仅一例为vanA阳性粪肠球菌，未发现vanB阳性肠球菌。通过富集肉汤后增检出的4例阳性样本均为vanA阳性屎肠球菌，证明富集策略显著提高VRE检测灵敏度。

ESBL筛查：

共检出45株肺炎克雷伯菌、3株产酸克雷伯菌、3株产气克雷伯菌等多种ESBL生产者。其中10例样本仅经富集法检出阳性，8例为产CTX-M酶的肺炎克雷伯菌，其余为产气克雷伯菌和居泉沙雷菌。所有菌株经协同试验确认ESBL表型，与既往研究一致，表明富集可使ESBL检出率提升20%以上。

CPO筛查：

大肠埃希菌（n=12）和肺炎克雷伯菌（n=11）为主要CPO物种，同时检出鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等。碳青霉烯酶基因以OXA型（如OXA-48、OXA-181）为主，其次为NDM、KPC、VIM等类型。富集肉汤额外检出10例CPO阳性样本，其中包括产NDM或OXA酶的大肠埃希菌、产KPC肺炎克雷伯菌等。在两例样本中，富集甚至帮助同时检出两种不同CPO物种，显示其在复杂定植情况下的优势。

通过系统比较，本研究得出结论：在常规MDR筛查流程中引入富集肉汤步骤可显著提高检测灵敏度，对CPO的检出率提升达58.8%，对ESBL和VRE也均提高20%。这一策略尤其适用于感染控制监测和暴发调查中对检测准确性要求较高的场景。不过，富集步骤会使结果报告时间延长一天，需在实际应用中权衡时效性与灵敏度。

研究的局限性包括单中心设计可能受本地流行病学特点影响，以及未对样本质量（如拭子是否带有可见粪便物质）进行严格标准化。但鉴于富集肉汤配方前期已通过多菌株体外优化，其方法具有良好的推广潜力。未来需进一步探索样本质量控制和流程标准化对检测性能的影响。

总之，这项研究为临床实验室优化MDR筛查提供了强有力证据，凸显了富集培养策略在精准感控和突发公共卫生事件应对中的重要价值。

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