综述：治疗性寡核苷酸分析分离技术的最新进展

　　本文系统评述了治疗性寡核苷酸（Oligonucleotides）分析技术的最新进展，重点涵盖色谱法（如离子对反相液相色谱）与毛细管电泳（CE）等分离方法，强调其在解决合成杂质（如截短序列）、确保质量控制及符合法规要求方面的关键作用，为定制化分析方案开发提供重要参考。

　　

引言

治疗性寡核苷酸（Therapeutic oligonucleotides）是一类通过调控基因表达（如RNA干扰或反义寡核苷酸技术）治疗疾病的新型药物。随着临床实验数量增加和市场扩展，其开发与质量控制需求日益迫切。然而，由于合成过程中引入广泛化学修饰（如硫代磷酸酯修饰PS-backbone），这些分子易形成复杂杂质谱（包括截短序列、失败合成产物等），对分析技术提出极高挑战。

分析挑战与需求

寡核苷酸治疗剂需通过严格纯化与表征以确保符合监管指南（如FDA/EMA要求）。每种寡核苷酸通常需定制分析协议，因分子结构（如siRNA、ASO、aptamer等）和修饰类型（2′-O-甲基、LNA等）差异显著。关键难点包括：

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  高分辨率分离合成相关杂质（如n-1序列）
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  监测化学稳定性与结合亲和力
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  应对规模化生产中的分析瓶颈

色谱技术进展

离子对反相液相色谱（IP-RP HPLC）成为主流技术，通过离子对试剂（如三乙胺醋酸酯）增强疏水性差异分离。超高效液相色谱（UHPLC）提升分辨率和速度，适用于大规模筛查。亲水相互作用色谱（HILIC）补充极性杂质分析，而尺寸排阻色谱（SEC）用于聚合体检测。

毛细管电泳应用

毛细管凝胶电泳（CGE）基于尺寸分离，高效解析长度变异体。毛细管区带电泳（CZE）凭借高灵敏度检测碱基修饰和电荷差异。微芯片电泳技术新兴发展，助力高通量分析。

结论与展望

色谱与电泳技术协同推进了寡核苷酸治疗剂的质控水平。未来需开发标准化协议与联用技术（如LC-MS），以应对个性化分析需求及监管挑战，加速此类药物临床转化。