透明质酸/氨基粘土纳米复合微针用于索马鲁肽无创递送在抗肥胖治疗中的制备与临床前评价

　　本研究开发了一种基于透明质酸（HA）和氨基粘土（AC）的溶解微针（MNs）系统，用于索马鲁肽（Sema）的无创透皮递送。该系统通过静电作用形成Sema-AC纳米复合物，显著增强药物经皮吸收与稳定性。体内外实验证实，Sema-AC/HA10微针具有优异机械强度（0.37±0.020 N/针）、快速溶解特性及良好存储稳定性，在2型糖尿病大鼠模型中展现出与皮下注射相当的降血糖（HbA1c）、调血脂（TC、TG）及减重效果，为糖尿病与肥胖治疗提供了创新性非侵入式给药策略。

　　

引言

2型糖尿病占全球糖尿病病例的约90%，其发病率正以惊人速度增长，构成重大公共卫生问题。该疾病与全球肥胖率上升密切相关，肥胖诱导的胰岛素抵抗是2型糖尿病发生和发展的主要风险因素。过量脂肪组织破坏正常代谢过程并损害葡萄糖调节。在众多治疗策略中，胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂因其在改善血糖控制和促进体重减轻方面的双重益处而受到广泛关注。

GLP-1通过多种生理机制发挥其有益作用。它刺激胰腺β细胞葡萄糖依赖性胰岛素分泌，抑制α细胞不适当的胰高血糖素释放，延迟胃排空，并通过影响中枢神经系统的食欲调节通路促进饱腹感。这些多方面的作用使GLP-1受体激动剂成为管理高血糖和肥胖的宝贵治疗选择。然而，内源性GLP-1的临床效用因其短血浆半衰期而受限，静脉给药后 rapidly被二肽基肽酶-4（DPP-4）降解。为解决这种代谢不稳定性，已开发出具有改善药代动力学特性的GLP-1类似物，包括利拉鲁肽、索马鲁肽（Sema）、阿必鲁肽和度拉鲁肽。这些类似物能抵抗DPP-4的降解，从而延长其作用持续时间并提高临床疗效。

在可用的GLP-1类似物中，索马鲁肽（Sema）因其约165小时的延长半衰期而显着，支持方便的每周一次给药并提高患者依从性。临床试验表明，与其他GLP-1受体激动剂相比，Sema能实现更大的糖化血红蛋白（HbA1c）水平降低和更显着的体重减轻。因此，Sema被广泛用于管理2型糖尿病和肥胖，为这些相互关联的代谢状况提供了全面的治疗方法。

在临床实践中，Sema通过皮下（SC）注射或口服片剂给药。虽然口服剂型提供了注射的替代方案，但由于酶降解和肠道吸收差，其全身生物利用度极低，需要在空腹条件下与吸收增强剂如N-[8-(2-羟基苯甲酰基)氨基]辛酸钠（SNAC）共同配制。通常，大生物分子（包括GLP-1受体激动剂）的口服递送受到代谢不稳定性和可变吸收的限制。透皮制剂已被研究作为替代方案；然而，它们经常遇到皮肤渗透不足以及生产和储存期间的不稳定性问题。同样，鼻腔和肺部递送允许快速进入系统，但其有效性受到粘膜表面酶降解、局部刺激和短停留时间的限制。这些限制强调了需要更可靠的非侵入性递送系统用于GLP-1受体激动剂，以实现与注射相当的足够生物利用度、稳定性和患者依从性。

在非注射制剂策略中，微针（MNs）已成为一种有前景的技术，用于高效透皮递送渗透性差的大分子。插入皮肤后，MNs机械穿透角质层并将药物直接递送到活表皮和真皮中，否则被动扩散穿过角质层将受到限制。与传统的透皮贴剂相比，MNs从而促进大分子（如Sema）的更有效递送，并促进更快进入体循环，导致更快速的起效。此外，MNs绕过胃肠道降解和肝脏首过代谢，这两者都限制了肽和蛋白质的口服递送。因此，这种方法可以用比口服制剂更小的剂量实现治疗性血浆浓度，从而降低总体治疗成本。此外，与常规注射相比，MNs可以通过最小化疼痛和不适并实现方便的自我给药来提高患者依从性。其高接受度已在临床研究中得到证实；例如，先前的研究观察到93%的人类受试者更喜欢溶解MN贴剂而不是注射，因为疼痛减轻和可以自我给药。同样，基于MN的流感疫苗接种与更高满意度和采用意愿相关，与皮下针相比。这些结果共同强调了MNs在增强糖尿病和肥胖等慢性疾病的依从性和治疗结果方面的潜力，这些疾病需要长期治疗。因此，MNs代表了对皮下注射和口服索马鲁肽制剂管理这些病症的有吸引力的替代方案。

MNs可以由各种材料制造，包括硅、不锈钢、钛和生物相容性聚合物。此外，MNs可定制大小、形状和功能以满足特定治疗需求。有几种类型的MNs，包括固体、涂层、空心、溶解和水凝胶形成MNs。其中，溶解MNs提供明显优势：它们在给药后消除尖锐医疗废物，允许高载药量，并且制造相对简单。在溶解MNs中加入生物相容性和可生物降解聚合物可增强药物稳定性，同时实现可控和持续的药物释放。溶解MNs中常用的聚合物包括聚（乳酸-共-乙醇酸）（PLGA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚乙烯醇（PVA）、聚己内酯（PCL）和透明质酸（HA）。每种材料表现出独特的优势和局限性。例如，PLGA实现可控药物释放，但可能在水解过程中产生酸性降解产物。PVP溶解快速，但其吸湿性可能损害稳定性。PVA提供良好的机械强度但比PVP溶解更慢。PCL确保长期稳定性但以极慢速率降解，限制了其快速药物释放的应用。另一方面，HA具有高度生物相容性，天然丰富于皮肤中，并且溶解快速，使其成为用于溶解微针的最临床相关聚合物之一。HA的生物相容性最小化了皮肤刺激或免疫反应的风险。此外，其固有的保湿和伤口愈合特性促进MN应用后的皮肤恢复。HA的粘弹性特性通过在不损害溶解效率的情况下提高机械强度进一步增强其在MN制造中的效用。

HA的分子量是影响MNs机械强度的关键因素，这直接影响其穿透皮肤和将药物递送到体循环的能力。因此，本研究在制造溶解MNs时采用了不同分子量的HA，并评估了这些变化如何影响其理化和药代动力学特性。

除了基质聚合物，药物-聚合物纳米复合物的形成可以显着影响通过MNs实现的全身药物暴露。先前的研究表明，基于粘土的纳米复合物通过促进内吞作用和诱导可逆紧密连接打开来增强大分子的细胞摄取。此外，当掺入聚合物MNs时，粘土提高针刚度，从而增加其机械强度。值得注意的是，掺入有机粘土的溶解MNs表现出增强的机械性能，确保可靠的皮肤穿透同时实现持续和可控的药物释放。在各种粘土中，氨基粘土（3-氨基丙基功能化镁页硅酸盐；AC）是一种阳离子有机粘土，易于分散在水性介质中并与带负电荷的蛋白质形成纳米复合物。这种相互作用改善肽药物的结构稳定性和细胞内化。因此，将基于AC的纳米复合物封装在MNs内可以增强蛋白质药物的生物利用度。基于此原理，本研究制造了由Sema和AC组成的纳米复合物，随后将其掺入基于HA的MNs中以最大化Sema的透皮吸收。为了比较，还制造了含有游离Sema的MNs。对开发的MNs的体外和体内特性进行了彻底评估，以确定最大化Sema透皮递送的最佳配方。

材料与方法

Sema和Cy5标记的牛血清白蛋白（Cy5-BSA）分别从杭州肽生物技术有限公司（中国杭州）和Protein Mods（Waunakee, WI, USA）获得。链脲佐菌素（STZ）、多聚甲醛和蔗糖购自Sigma-Aldrich Co.（St. Louis, MO, USA）。分子量为10 kDa（HA10）和33 kDa（HA33）的HA分别来自Lifecore Biomedical, Inc.（Chaska, MN, USA）和Bloomage Biotech Co., Ltd.（中国济南）。聚二甲基硅氧烷（PDMS）模具从Micropoint Technologies Pte Ltd.（Pioneer Junction, Singapore）获得。猪尸体皮肤和苏木精和伊红（H&E）染色试剂盒分别购自Apures Co., Ltd.（Pyeongtaek, Korea）和TissuePro Technology（Gainesville, Florida, USA）。氨基粘土（3-氨基丙基功能化镁页硅酸盐）如先前所述合成。其他化学品购自Junsei Chemical Co., Ltd.（东京，日本），高效液相色谱（HPLC）级溶剂，包括乙腈和甲醇，购自Avantor Co.（Radnor, PA, USA）。

溶解微针的制备

Sema和AC的纳米复合物（Sema-AC）使用先前建立的方法制备。将AC水溶液（10 mg/mL）逐渐添加到Sema溶液（10 mg/mL在蒸馏水中），粘土与药物的比例为2:1（v/v），在300 rpm下连续搅拌1小时。所得沉淀物通过在22,250 × g下离心15分钟收集，随后用蒸馏水洗涤三次。获得的沉淀物然后在室温下真空干燥，产生白色粉末形式的Sema-AC纳米复合物。

为了制造MNs，将Sema-AC纳米复合物（10 mg/mL）分散在蒸馏水中，并与HA水溶液（150 mg/mL）以4:1体积比在100 rpm连续搅拌下混合。然后使用两种不同的制造技术将混合物引入PDMS模具中：（1）离心，其中模具在4°C下以3265 × g旋转15分钟，或（2）真空处理，其中模具暴露于真空压力（0.8 bar）20分钟。在此初始加载步骤之后，MNs在室温下风干12小时。为了创建背衬层，将额外的HA溶液（150 mg/mL）施加到模具上，随后在室温下再进行12小时干燥期。为了比较，使用相同程序制备含有游离Sema（无AC复合）的MNs。

载药微针的理化和形态表征

使用动态光散射（DLS）与Zetasizer（Nano-ZS90, Malvern Instruments, Malvern, UK）测量Sema-AC纳米复合物的粒径、多分散指数（PDI）和zeta电位。使用以下公式确定Sema-AC纳米复合物的包封效率（EE）：

EE (%) = (Amount of drug in nanocomplex / Total amount of drug added) × 100

使用圆二色谱（CD）光谱（Chirascan?-Plus Spectrometer, Applied Photophysics, Surrey, UK）评估MNs内Sema的结构完整性。在25°C下，在200-260 nm波长范围内记录从MNs在PBS缓冲液（pH 7.4）中释放的Sema的光谱测量。光路长度和带宽分别设置为0.5 mm和1 nm。为了评估MNs内Sema-AC的尺寸分布，首先将MNs溶解在蒸馏水中。然后使用Amicon Ultra-4离心过滤器（Millipore, Billerica, MA）将所得悬浮液在2000 × g下离心20分钟以分离纳米颗粒。将收集的纳米颗粒重新悬浮在蒸馏水中，并使用Zetasizer（Nano-ZS90, Malvern Instruments, Malvern, UK）测量它们的尺寸分布。

使用扫描电子显微镜（SEM）（CLARA LMH, TESCAN Brno, Czech Republic）检查制造的溶解MNs的形态。使用质地分析仪（TA-XT express, Stable Micro Systems, UK）测量MNs的机械强度。将MNs固定在该分析仪的平坦铝基板上，针尖朝上。在分析过程中，顶部探针以0.05 mm/s的控制速度向MNs前进，并且启动测量的触发力设置为0.049 N。

微针的储存稳定性

将制造的MNs在25°C和60 ± 5%相对湿度（RH）下，在有或没有硅胶的密闭容器中储存7天。在整个储存期间监测关键特性，包括机械强度、重量、药物完整性和药物释放，并与第0天观察到的那些进行比较。此外，在第0天和第7天评估MNs内Sema-AC的尺寸分布，以评估随时间推移的任何潜在聚集或降解。

为了评估药物释放曲线，将MNs浸入5 mL磷酸盐缓冲盐水（PBS, pH 7.4）中，并在37°C摇动水浴中孵育，连续以100 rpm搅拌。在指定时间间隔，收集样品并在4°C下以22,250 × g离心15分钟。使用HPLC定量释放的药物量，如先前所述。

微针的体外皮肤渗透特性

在插入MNs之前，用乙醇清洁猪尸体皮肤表面以去除水分，随后干燥5分钟。将MNs插入猪尸体皮肤并保持原位1分钟。移除MNs后，将皮肤固定在4%多聚甲醛溶液中并在4°C储存12小时。固定后，将样品依次在20%和30%蔗糖溶液中在4°C脱水。随后将其包埋在最佳切割温度（OCT）化合物中，并使用冷冻切片机（Leica, Nussloch, Germany）切成15 μm厚的冷冻切片。用H&E染色组织切片，并使用Eclipse Ti-U倒置显微镜（Nikon, Tokyo, Japan）检查。还在猪尸体皮肤中评估了MNs的溶解曲线。按照前面描述的插入程序后，在预定间隔（0, 3, 5, 和15分钟）移除MNs，用于使用扫描电子显微镜（SEM, CLARA LMH, TESCAN Brno, Czech Republic）进行形态分析。

使用动物模型的体内研究

大鼠微针插入后皮肤恢复的评估

在从Orient Bio Inc.（Seongnam, Korea）获得的雄性Sprague-Dawley大鼠（180-200g）中评估MN插入后的皮肤再密封。研究方案经东国大学审查委员会（IACUC-2023-040-1）批准。将MNs应用于大鼠的背部区域1分钟。移除MNs后，在预定间隔（0, 0.5, 1, 和2小时）使用数码相机检查所得穿透部位的形态。

大鼠透皮药物渗透的评估

为了可视化通过溶解MNs的透皮药物扩散，使用Cy5-BSA作为荧光探针代替Sema并掺入MNs中。从Orient Bio Inc.（Seongnam, Korea）获得雄性Sprague-Dawley大鼠（180-200 g），研究方案经东国大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准（IACUC-2023-040-1）。将大鼠分为两组（每组三只大鼠）。一组给予载有Cy5-BSA-AC的MNs，而另一组给予游离Cy5-BSA溶液，两者均以相当于0.08 mg/kg Cy5-BSA的剂量应用于背部皮肤。在预定间隔（0.5, 1, 和2小时），处死大鼠，并立即切除其背部皮肤。将切除的皮肤样品在4%多聚甲醛溶液中固定8小时，然后在4°C的30%蔗糖溶液中脱水24小时。脱水后，将样品包埋在OCT化合物中，并使用冷冻切片机（Leica, Nussloch, Germany）以15 μm厚度进行冷冻切片。使用共聚焦显微镜（Nikon C1, Nikon, Tokyo, Japan）检查样品。

大鼠药代动力学研究

在大鼠中评估MNs的药代动力学特性，遵循东国大学审查委员会批准的实验方案（IACUC-2023-040-1）。从Orient Bio Inc.（Seongnam, Korea）获得雄性Sprague-Dawley大鼠（180-200 g）并分配到三组（每组n = 6）。每组接受以下MNs之一：Sema/HA33、Sema-AC/HA33或Sema-AC/HA10，剂量相当于400 μg/kg Sema。在指定时间点从颈静脉收集血液样品。将样品在4°C下以16,600 × g离心10分钟。将所得血浆样品储存在-80°C直至进一步分析。使用LC-MS/MS分析定量血浆药物浓度，如先前所述。

在2型糖尿病大鼠中治疗功效的评估

在2型糖尿病大鼠模型中评估开发的MNs用于肥胖治疗的体内有效性。实验方案经东国大学审查委员会批准（IACUC-2023-040-1）。按照先前描述的方法建立2型糖尿病大鼠模型。给大鼠喂食高脂饮食3周，随后禁食6-8小时。禁食后，以40 mg/kg剂量在50 mM柠檬酸盐缓冲液（pH 4.5）中腹腔内施用链脲佐菌素（STZ）。STZ注射十天后，使用血糖仪（ACCU-CHEK^? guide）测量血糖水平。选择体重450-500 g且血糖水平≥ 240 mg/dL的大鼠用于MNs的体内功效研究。

将STZ诱导的2型糖尿病大鼠分为三组（每组n = 6），每组接受以下治疗之一：皮下（SC）注射盐水、SC注射Sema（0.4 mg/kg）、或插入载有Sema-AC的MNs（递送等效剂量0.4 mg/kg Sema）。每种治疗每天一次施用，持续30天。在整个研究过程中，定期监测各种生理参数，包括血糖、HbA1c、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、食物摄入、水消耗和体重。每天给大鼠提供200 ± 1 g食物和500 ± 1 mL普通自来水。24小时后，测量剩余的食物和水。从颈静脉收集血液样品，并使用ACCU-CHEK^? Guide量化血糖水平。使用A1C EZ 2.0?糖化血红蛋白仪（BioHermes, Wuxi, China）评估HbA1c水平。使用Barozen血脂仪（Handok, Seoul, Republic of Korea）测量TC和TG水平。

药代动力学和统计分析

使用非房室分析评估药代动力学参数。使用线性梯形法计算血浆浓度-时间曲线下面积（AUC）。通过实验数据的视觉检查确定最大血浆浓度（C_max）和达到C_max的时间（T_max）。通过使用最佳拟合线斜率的回归分析确定消除速率常数（K_el）。随后使用方程0.693/K_el计算半衰期（T_1/2）。

所有数据均以平均值和标准差（mean ± SD）表示。采用单因素方差分析（One-way ANOVA），随后进行Dunnett检验，以评估治疗组之间的统计差异，p值 < 0.05表示统计显着性。

结果与讨论

HA/AC基溶解微针的制备

Sema在中性pH下由于其等电点为5.4而带负电荷。因此，纳米复合物（Sema-AC）通过带负电荷的Sema和带正电荷的AC之间的静电相互作用自发形成。Sema-AC表现出≥ 90%的包封效率，并且具有217 ± 4.78 nm的平均粒径。FT-IR和CD分析证实了纳米复合物的形成和封装Sema的构象稳定性。

鉴于Sema-AC显着增加跨细胞膜的药物转运，将Sema-AC掺入MNs有望改善Sema的透皮递送。因此，制备了含有Sema-AC或游离Sema的MNs以评估Sema-AC的优势。此外，改变制备方法和HA的分子量以检查它们对MNs机械强度的影响。

所有三种MNs均制备为均匀的MN阵列。MNs呈现金字塔形状，具有800 μm的针尖高度和200 μm的基部宽度。CD分析表明，Sema的二级结构在整个制造过程中保持完整。从MNs释放的Sema的CD光谱与标准药物的光谱紧密匹配，表明Sema的构象稳定性在MNs内得到良好保持。

有效的皮肤穿透和药物递送要求MNs具有≥ 0.058 N/针的机械强度。所有基于HA的MNs表现出范围在0.16至0.38 N/针的机械强度，这足以用于皮肤穿透。MNs的机械强度受到三个关键因素的影响：药物配方（游离药物与纳米颗粒）、制备方法（离心与真空）和HA的分子量（10 kDa与33 kDa）。载有Sema-AC的MNs表现出比载有游离药物的MNs更低的机械强度，这种降低在药物加载期间采用离心时更为明显。这种减少可能源于纳米颗粒在离心或真空过程中积聚在针的下部，削弱针尖并降低MNs的机械强度。因此，制备方法显着影响载有Sema-AC的MNs的强度。相比之下，载有游离药物的MNs保持一致的机械强度，无论是否采用离心或真空方法。HA的分子量也显着影响MNs的机械强度。较低分子量的HA实现更大的机械强度；Sema-AC/HA10和Sema-AC/HA33的机械强度分别为0.37 ± 0.02 N/针和0.25 ± 0.01 N/针。通常，随着HA分子量的增加，MNs的机械强度趋于降低。这种现象归因于低分子量HA在MN固化过程中形成紧密堆积的分子结构，从而增强机械强度。相比之下，高分子量HA的线性结构表现出更大的构象灵活性，导致分子堆积过程中增加弯曲和扭转。这种低效的分子堆积降低了机械强度。Chi等人也报道，与使用罗丹明B作为模型药物，用更高分子量HA（74 kDa和290 kDa）制造的MNs相比，用10 kDa-HA制备的MNs表现出最高的机械强度。

总之，制备方法和HA的分子量显着影响载有Sema-AC纳米颗粒的MNs的机械强度。虽然所有测试的MNs的机械强度超过皮肤穿透所需的最小力，但使用真空方法制备的Sema-AC/HA10 MNs表现出更高的机械强度。

大鼠微针的药代动力学评估

在大鼠中通过MNs或SC注射给药后评估Sema的药代动力学曲线。通过比较它们的血浆药物暴露与SC注射实现的那些来估计MNs的相对生物利用度。首先，研究评估了基于AC的纳米复合物如何影响MNs的药代动力学。与载有游离药物的Sema/HA33相比，含有Sema-AC纳米复合物的Sema-AC/HA33表现出显着更高的全身药物暴露，C_max增加1.74倍，AUC增加2.74倍。尽管机械强度较低，Sema-AC/HA33表现出优异的透皮药物吸收。这种改善可归因于基于AC的纳米复合物，它促进内吞作用并诱导可逆的紧密连接调节。在我们先前的研究中，在Caco-2细胞中，Sema-AC与游离Sema相比增强了药物渗透性约3.3倍。这种渗透性的增加很可能归因于上皮紧密连接的瞬时松动，从而促进旁细胞药物转运。同时，Sema-AC的带正电荷的胺官能团与带负电荷的膜组分发生静电相互作用，增强细胞关联和随后的内化。这些互补机制赋予药物转运的双重增强：通过调节的紧密连接的旁细胞通道和通过内吞途径的跨细胞摄取。因此，载有Sema-AC纳米复合物的MNs显着改善了Sema的皮肤渗透，导致大鼠中更高的全身药物暴露。

还在大鼠中检查了MN基质对药代动力学的影响。Sema-AC/HA10导致比Sema-AC/HA33约高1.65倍的全身药物暴露。如先前讨论，Sema-AC/HA10表现出比Sema-AC/HA33更高的断裂抵抗力，这可能使其能够更深的皮肤穿透和更有效的药物递送到皮肤层中的血管。

总之，Sema-AC/HA10在测试的MNs中表现出最高的生物利用度，这可能归因于其强大机械强度和掺入基于AC的纳米复合物的协同效应。这些发现导致选择Sema-AC/HA10作为最佳MN用于进一步表征，包括皮肤穿透、储存稳定性和体内功效的评估。

Sema-AC/HA10 MNs的皮肤穿透特性和储存稳定性

猪皮肤由于其可比的组织学和生理特性而被认为是人类皮肤的合适替代品，尽管存在某些固有差异。因此，使用猪尸体皮肤评估了MNs的皮肤穿透和随后的溶解。Sema-AC/HA10成功穿透猪尸体皮肤的表皮，达到约400 μm的深度。测量的穿透深度小于针尖的全高（~800 μm）。这种减少的深度可能归因于两个因素：皮肤插入后针尖的快速溶解和皮肤的固有弹性，它抵抗MNs的深度穿透。Sema-AC/HA10在插入皮肤后迅速溶解，这可能促进从MNs的立即药物释放。

还在大鼠中评估了MN插入后的皮肤恢复。MN插入创建的微孔迅速密封，早在插入后2小时就观察到没有可见开口。此外，没有观察到皮肤刺激或出血的迹象。微孔的快速闭合特别有益，因为它降低了潜在的感染风险。总之，这些发现表明Sema-AC/HA10可以有效地递送药物，同时最小化不良皮肤反应，最终增强患者依从性。

为了评估通过载有药物-AC纳米复合物的MNs的药物扩散穿过皮肤，使用Cy5-BSA作为荧光探针进行了生物成像研究。将载有Cy5-BSA-AC纳米复合物（Cy5-BSA-AC/HA10）或游离Cy5-BSA溶液的MNs应用于大鼠的背部皮肤。然后使用共聚焦显微镜评估Cy5-BSA跨皮肤层的分布。游离Cy5-BSA溶液主要局限于角质层，没有显着渗透到表皮或真皮中。这一发现表明Cy5-BSA，一种高分子量蛋白质，不能有效地独自穿过皮肤屏障。这与先前的研究一致，表明分子≥ 500 Da通过皮肤的被动扩散有限。相比之下，Cy5-BSA-AC/HA10显示出跨皮肤层的显着药物扩散。MN应用后，强烈的荧光信号最初集中在微孔周围，但随着时间的推移逐渐分散到真皮区域。此外，MNs创建的微孔随着时间的推移逐渐恢复。这些发现表明，载有药物-AC纳米复合物的HA10 MNs为蛋白质药物提供了有效的透皮递送系统，克服了与大分子相关的固有屏障。

由于环境条件如温度和湿度会影响MNs的机械强度和性能，在25°C储存期间，在有和没有硅胶作为干燥剂的情况下评估了Sema-AC/HA10的稳定性。当储存没有硅胶时，MNs的机械强度随着时间的推移逐渐降低，可能由于吸湿。相比之下，当用硅胶储存时，Sema-AC/HA10的机械强度保持稳定，重量没有显着变化。这些发现强调了在储存期间控制水分的重要性。为了进一步评估MNs内Sema的结构稳定性，进行了CD光谱分析以评估其构象完整性。从MNs释放的Sema在储存7天后的CD光谱与第0天记录的光谱紧密匹配，证实在硅胶存在下其结构构象保持完整。此外，MNs的溶解特性在储存期间不受影响，表明随时间推移的性能一致。还检查了MNs内Sema-AC纳米复合物的稳定性。Sema-AC纳米复合物在MNs中的尺寸分布保持不变，表明在储存期间纳米颗粒没有显着聚集。

这些发现表明MNs的关键特性——包括机械强度、溶解行为、封装药物的构象稳定性和纳米颗粒尺寸