基于PRiME HLB μElution平台开发UPLC-MS/MS法同步检测人体三种体液中12种脂溶性贝类毒素的应用研究

　　本文开发了一种基于PRiME HLB μElution样品前处理平台的UPLC-MS/MS方法，实现了人血浆、血清和尿液中12种脂溶性贝类毒素（LSTs）的高灵敏度、高通量同步检测。该方法通过优化μElution板类型、洗脱液稀释因子和基质效应补偿策略，显著提升了复杂生物基质中痕量毒素分析的回收率（69.0–124.0%）与重现性（RSD 1.1–15.3%），为临床中毒诊断和生物监测提供了可靠技术方案。

　　

Standards and reagents

认证参考标准品包括OA（1000 μg/mL）、YTX（5.5 μg/mL）、hYTX（5 μg/mL）、DTX1（7.8 μg/mL）、AZA1（1.21 μg/mL）、AZA2（1.19 μg/mL）、AZA3（1.18 μg/mL）、SPX1（5.02 μg/mL）、PTX2（4.41 μg/mL）、GYM（2.5 μg/mL）和BTX3（10 μg/mL），均购自中国青岛Pribolab生物工程有限公司，所有标准品溶于甲醇。液相色谱-质谱级甲醇、乙腈、甲酸铵（AMF, ≥99.0%）、甲酸（FA, ≥98.0%）及分析纯28%氨水购自美国Thermo Fisher Scientific公司。实验用水为Milli-Q超纯水系统（18.2 MΩ·cm）制备。

Optimization of UPLC conditions

当前基于UPLC-MS/MS的LSTs分析方法常采用两类流动相体系：酸性体系（含甲酸铵和甲酸的水/乙腈）或碱性体系（含氨水的乙腈/水）。本研究比较了四种流动相组合：（a）6.7 mmol/L NH₄OH；（b）6.7 mmol/L NH₄OH + 2 mmol/L AMF；（c）0.1% FA；（d）0.1% FA + 2 mmol/L AMF。结果显示，碱性条件（a组）在毒素峰形、响应强度和分离度方面表现最优，最终采用含6.7 mmol/L氨水的水-乙腈梯度系统，在8分钟内完成12种毒素的色谱分离，且系统稳定性良好。

Conclusion

本研究成功建立了一种快速、灵敏、高通量的UPLC-MS/MS方法，结合PRiME HLB μElution样品前处理平台，实现了人血浆、血清及尿液中12种脂溶性贝类毒素的同步测定。通过系统优化μElution板类型、洗脱液稀释因子与色谱条件，并全面评估基质效应，显著降低了复杂生物基质的干扰。研究证明，该μElution流程在回收率与稳健性上均优于传统固相萃取（SPE），为临床诊断与生物监测提供了可靠、高效的分析手段。