古金录验续命汤的现代科学解码：古老智慧如何通过促进血管新生改善脑梗死

　　本研究针对传统日本汉方（Kampo）油膏在伤口愈合应用中化学组成与生物活性不明的问题，采用代谢组学（LC-HRMS/MS）与体外细胞模型（角质形成细胞划痕实验和EdU增殖检测）相结合的策略，系统分析了不同提取温度（如高温加热HH、低温加热LH和室温浸渍M）和药材来源对紫云膏（Shiunkō）和神仙太乙膏（Shinsen taitsukō）脂溶性成分及活性的影响，发现高温制备导致活性成分（如生育酚和甾醇）降解并可能延迟伤口闭合，为传统油膏制剂标准化和临床应用提供了科学依据。

　　

在传统医学与现代科学交汇的前沿，伤口愈合研究一直面临着一个核心挑战：许多传统外用药制剂虽经验证有效，但其活性成分和作用机制却鲜为人知。尤其在日本汉方医学（Kampo）中，以芝麻油为基质提取草药制成的油膏，如紫云膏（Shiunkō）和神仙太乙膏（Shinsen taitsukō），被广泛用于治疗皮肤创伤、烧伤和溃疡，但其脂溶性化学成分和相应的生物学效应尚未得到系统科学的阐释。这种认知空白主要源于以往研究多集中于水溶性或醇溶性植物提取物，而忽略了油基提取物中独特的脂溶性代谢物群体。此外，传统油膏的制备工艺存在显著差异——从室温浸渍到高温加热，不同方法可能导致化合物降解或转化，进而影响药效。因此，探究不同制备工艺对Kampo油膏化学组成及生物活性的影响，不仅有助于阐明传统制剂的科学内涵，也对优化创伤修复治疗策略具有重要价值。

为此，研究人员开展了一项综合研究，结合民族药学调查、化学分析和功能实验，旨在揭示Kampo油膏的化学多样性及其对伤口愈合关键细胞行为的影响。该研究论文已发表于《Journal of Ethnopharmacology》。

为开展本研究，作者采用了多个关键技术方法：通过民族药学调研（访谈医生、药师和生产商）明确了Kampo油膏的制备实践；选取Angelica acutiloba等药材，经鉴定和粉碎后，以芝麻油为溶剂，分别采用室温浸渍（M）、低温加热（LH，80°C）和高温加热（HH，200–230°C）制备提取物；利用液相色谱-高分辨质谱（LC-HRMS和LC-HRMS/MS）进行非靶向代谢组学分析，结合分子网络（MetGem、SIRIUS等）进行化合物注释；使用人永生化角质形成细胞（N/TERT-2G），通过划痕实验检测细胞迁移，EdU（5-ethynyl-2′-deoxyuridine）掺入法检测增殖，并使用Incucyte?系统进行实时成像和数据分析。

研究结果丰富而多层次，从不同角度揭示了制备条件和药材来源对Kampo油膏化学与生物学特性的影响。

3.1. Defining Kampo extracts

通过实地调研，研究明确了日本常用的三种Kampo油膏：紫云膏（Shiunkō）、中黄膏（Chuōkō）和神仙太乙膏（Shinsen taitsukō），并聚焦于前两者。这些油膏的共同基础是芝麻油，并加入蜂蜡等增稠剂，但制备方法（如提取温度和时间）和药材配比存在差异。

3.2. Characterising the implications of heating sesame oil

研究发现，芝麻油本身在不同加热条件下（M、LH、HH）其代谢物组成发生显著变化。高温加热导致甘油三酯（TGs）水解产生单甘酯（MAGs）和甘油二酯（DAGs），同时引起抗氧化成分（如生育酚）的降解。尽管化学分析显示显著差异，但生物学实验表明，不同芝麻油制备条件对角质形成细胞迁移和增殖均无显著促进效果。

3.3. Impact and influences of A. acutiloba root in Kampo ointments

当考察Angelica acutiloba（东当归）单味药材的油提取物时，研究发现，尽管不同地理来源和制备温度的提取物在化学组成上存在差异（如糖基化萜类化合物的含量变化），但它们均未在角质形成细胞模型中表现出优于单纯芝麻油的生物活性。这表明，单味药材的加入并未额外增强促愈合能力。

3.4. Comparative exploration of complete Kampo formulas compared to A. acutiloba extracts

然而，当研究完整的复方油膏（紫云膏S6HH和神仙太乙膏TMO）时，出现了意想不到的结果：与相应的东当归单提取物相比，完整复方反而延迟了角质形成细胞的迁移。代谢组学分析提示，这可能与复方中其他药材的引入有关。对于紫云膏，其高温加热制备可能导致具有潜在促愈合活性的氢醌类脂质（如维生素E类似物）的损失；而对于神仙太乙膏，其特有的酯化二萜类化合物被检测出来，这类化合物可能对细胞迁移产生抑制作用。

研究的结论与讨论部分对上述发现进行了整合与深化。本研究首次系统揭示了传统Kampo油膏制备工艺的多样性（特别是加热温度）和药材来源对其脂溶性代谢物组成的显著影响。高温和长时间的提取不仅促使新的脂类化合物形成，也导致已知具有伤口愈合活性的代谢物（如生育酚、甾醇）降解。此外，药材的地理起源影响了与伤口愈合相关的糖基化萜类等化合物的含量。尤为重要的是，体外实验发现完整的复方制剂反而延缓了角质形成细胞的迁移，这可能与活性成分的降解或细胞毒性化合物的产生有关，也可能提示当前使用的单层细胞模型在评估如此复杂的脂溶性制剂时存在局限性。

该研究的意义在于它强调了将传统制备实践与现代代谢组学和分析技术相结合的必要性。它证实了“制备方法显著影响传统草药的化学和生物学特性”这一关键假设。尽管完整的复方在简单细胞模型中未显示促进作用，但这并不直接否定其临床有效性，因为伤口愈合是一个涉及炎症、增殖和重塑等多阶段的复杂过程，而本研究仅考察了增殖和迁移的早期方面。未来的研究需要采用更先进的模型（如3D皮肤模型或体内实验）来验证这些发现，并应致力于分离和鉴定特定的活性或抑制性化合物，以真正阐明Kampo油膏的作用机制，从而推动传统医学的标准化和科学化，为开发更有效的伤口治疗药物奠定基础。