菊花提取物通过调控VEGF和Nrf2通路减轻年龄相关性黄斑变性的病理性血管生成

　　本研究聚焦传统日本汉方软膏（Kampo ointments）在伤口愈合中的应用难题，针对其脂溶性提取物化学组成与生物活性不明的问题，研究人员综合运用民族药理学调查、非靶向代谢组学（LC-HRMS/MS）及体外角质形成细胞模型（N/TERT-2G），系统分析了紫云膏（Shiunkō）和神仙太乙膏（Shinsen taitsukō）在不同提取温度（常温浸渍M、低温加热LH、高温加热HH）下的代谢谱差异及其对细胞迁移（scratch assay）与增殖（EdU法）的影响。研究发现提取温度及原料来源显著改变代谢物组成，高温导致生育酚（tocopherols）和甾醇（sterols）等活性成分降解，而完整配方意外延迟伤口闭合，提示细胞模型对复杂脂质制剂评估存在局限性。该研究为传统油基草药制剂的标准化和临床应用提供了关键科学依据。

　　

在传统日本医学（Kampo）中，以芝麻油为基质提取草药制成的软膏被广泛应用于皮肤创伤治疗，但其脂溶性成分的化学组成和药理活性始终是未被深入探索的"黑箱"。与常见的水醇提取物不同，这些油基制剂在制备过程中存在显著差异：从原料药材的物种选择、地理来源，到提取温度（常温浸渍、80°C低温加热或200-230°C高温加热）和持续时间，均缺乏标准化规范。更关键的是，高温处理可能导致具有伤口愈合活性的代谢物降解，或产生细胞毒性成分，但这一假设缺乏系统验证。正是为了破解这些难题，由Manon Paul-Traversaz领衔的研究团队开展了这项融合民族药理学、代谢组学和细胞生物学的综合研究，成果发表在《Journal of Ethnopharmacology》。

研究人员通过访谈日本医师、药师和生产商（n=9）明确了三种传统软膏（紫云膏Shiunkō、中黄膏Chuōkō和神仙太乙膏Shinsen taitsukō）的制备规范，重点选取前两种开展实验。他们采用液相色谱-高分辨质谱（LC-HRMS/MS）技术分析不同温度提取的芝麻油及药材提取物的代谢谱，并通过体外角质形成细胞模型（N/TERT-2G）评估其对细胞迁移（划痕实验）和增殖（EdU标记）的影响。所有植物材料均来自日本和中国供应商，经日本药典（第18版）宏观鉴定确认。

研究结果揭示多个重要发现：

3.1. 定义汉方提取物

通过民族药理学调查确认了紫云膏和神仙太乙膏的三种提取工艺：常温浸渍（M）、低温加热（LH）和高温加热（HH），其中紫云膏可采用全部三种方法，而神仙太乙膏仅使用M和LH法。配方组成分析显示紫云膏含紫草（Lithospermum erythrorhizon）和东当归（Angelica acutiloba），神仙太乙膏则包含七种药材（如肉桂Cinnamomum cassia、大黄Rheum tanguticum等）。

3.2. 芝麻油加热的影响特征

代谢组学分析表明，加热温度显著改变芝麻油的代谢物组成。高温加热（HH）导致游离脂肪酸（如亚油酸C18:2、油酸C18:1）释放增加，但使生育酚（如δ-tocopherol）、甾醇（如β-谷甾醇sitosterol）和木脂素（sesamin）等生物活性成分降解。分子网络分析进一步发现HH处理产生特异性甘油酯（如单油酸甘油酯MAG、二油酸甘油酯DAG）和梅拉德反应产物（MRPs）。尽管化学组成变化显著，但不同芝麻油提取物在角质形成细胞迁移和增殖实验中均未表现出显著生物学差异。

3.3. 东当归根在汉方软膏中的影响

单味东当归提取物（S1M、S1LH、S1HH和T1M1、T1LH1）的细胞实验显示，不同地理来源（山口县vs.奈良/和歌山）和提取温度对角质形成细胞行为无显著影响。然而，代谢组学发现山口县产的东当归中糖基化三萜类化合物（glycosylated terpenoid）含量更高，该类成分与伤口愈合活性相关。

3.4. 完整汉方配方的比较研究

令人意外的是，完整配方（紫云膏S6HH和神仙太乙膏TMO）反而延迟了伤口闭合速度。通过Biosigner特征筛选分析发现，紫云膏中维生素E样氢醌脂质（vitamin E-like hydroquinone lipids）的损失可能与这种抑制效应相关；而神仙太乙膏中特有的酯化二萜类化合物（esterified diterpene）也被识别为潜在影响因素。

研究结论强调，汉方软膏的化学复杂性和生物活性受到提取温度、原料来源和配方组成的多重影响。高温处理虽然促进某些脂质转化物的形成，但也导致关键愈合相关代谢物（如生育酚、甾醇）的降解。完整配方表现出的抑制效应可能源于细胞模型对复杂脂质制剂的不适应性，或配方中某些成分的细胞毒性作用。该研究不仅为传统汉方软膏的质量控制提供了科学依据，也为其在伤口护理中的合理应用指明了方向，强调需要开发更先进的生物模型（如3D皮肤等效物）来准确评估这类复杂制剂的实际疗效。