艾灸对反复给予DSS诱导的溃疡性结肠炎大鼠中P2X7R/NF-κB通路的影响

《Acupuncture and Herbal Medicine》：Effect of moxibustion on P2X7R/NF-κB pathway in ulcerative colitis rats with repeated induction of DSS

　　溃疡性结肠炎模型制备后，实验组大鼠接受天枢（ST25）与气海（RN6）穴位隔药艾灸干预，观察发现结肠病理损伤评分降低，血清TNF-α和IL-6水平显著下降，同时结肠组织P2X7R和NF-κB p65蛋白表达量均显著低于模型组（均P<0.05）。机制研究显示，P2X7R KO小鼠模型中NF-κB p65蛋白表达降低50%-60%，证实P2X7R/NF-κB通路在UC炎症调控中起核心作用。隔药艾灸通过调节该通路抑制促炎因子释放，促进黏膜修复。

　　本研究围绕“艾灸通过P2X7受体/NF-κB通路调节溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠道炎症因子表达的机制”展开，旨在探讨传统中医治疗方法在现代医学研究中的作用。溃疡性结肠炎是一种慢性炎症性肠病，主要影响结肠和直肠的黏膜层，其临床表现包括腹痛、腹泻、黏液血便等，且在某些情况下可能引发皮肤、眼睛、关节及肝胆系统的并发症。随着全球范围内UC患病率的上升，尤其是在发展中国家，该疾病对医疗资源构成了越来越大的压力。尽管已有多种药物治疗手段，如5-氨基水杨酸、糖皮质激素和硫嘌呤类药物，以及生物制剂和小分子药物的出现，使得治疗目标从单纯缓解症状扩展到实现临床和内镜下的完全缓解，但目前尚无根治UC的方法。因此，探索新的治疗策略具有重要意义。

艾灸作为中医传统疗法之一，因其安全性和有效性在UC治疗中展现出广阔的应用前景。近年来，多项研究表明，艾灸能够通过调节免疫平衡、改善肠道黏膜病变和抑制肠道炎症等机制发挥作用。然而，其具体的治疗机制尚未完全阐明。本研究聚焦于P2X7受体与NF-κB通路之间的关系，尝试揭示艾灸如何通过影响这一信号通路来发挥抗炎作用。P2X7受体是嘌呤能受体的一种，主要分布在上皮细胞和多种免疫细胞上，在炎症反应中扮演关键角色。当P2X7受体被激活时，会通过MAPK通路促进NF-κB的激活，导致IκB的磷酸化和泛素化，进而引起IκB的蛋白酶体降解和NF-κB的核转位，最终诱导促炎基因的表达。促炎因子如肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）则通过正反馈机制进一步激活NF-κB，形成炎症反应的恶性循环。同时，NF-κB还参与调控肠上皮细胞的生存功能，同时在先天和适应性免疫反应中引发促炎级联反应。P2X7受体和NF-κB的协同作用被认为在UC的发病机制中起关键作用。

为了验证P2X7受体在UC发病过程中的作用，研究中采用了P2X7R基因敲除小鼠作为实验对象。结果表明，与野生型小鼠相比，P2X7R基因敲除小鼠在UC模型中表现出更轻微的肠道炎症反应，包括更少的上皮损伤、炎症细胞浸润以及更低的NF-κB p65蛋白表达水平。这一发现支持了P2X7R在调控炎症反应中的核心作用，并进一步表明，抑制P2X7R能够有效减轻UC的病理变化。

随后，研究者使用DSS诱导的UC大鼠模型，进一步探讨了艾灸干预对P2X7R/NF-κB通路的影响。实验设计包括四个组别：正常对照组、UC模型组、正常+艾灸干预组以及UC模型+艾灸干预组。在UC模型组中，大鼠表现出典型的肠道炎症症状，如体重下降、进食和饮水减少、稀便、便血以及肛周污染。而接受艾灸干预的模型组大鼠则在一般状态、肠道组织病理变化和黏液分泌等方面出现了显著改善。同时，研究发现，与正常组相比，UC模型组大鼠的血清中TNF-α和IL-6浓度显著升高，而艾灸干预后这些炎症因子的水平明显下降。此外，P2X7R和NF-κB p65蛋白在UC模型组的表达水平也显著升高，但在艾灸干预组中有所降低。这些结果表明，艾灸能够通过调节P2X7R/NF-κB通路，从而抑制促炎因子的表达，减轻肠道炎症反应。

在肠道组织的病理学分析中，研究者使用HE染色和PAS染色对大鼠的结肠组织进行了观察。HE染色结果显示，正常组和正常+艾灸组的结肠上皮结构完整，而UC模型组则表现出严重的上皮损伤、炎症细胞浸润以及腺体结构破坏。相比之下，接受艾灸干预的模型组大鼠的结肠组织结构有所恢复，炎症细胞浸润程度减轻，部分溃疡区域已愈合。PAS染色进一步揭示了肠道内黏液分泌情况，结果显示，UC模型组的杯状细胞数量减少，黏液分泌功能受损，而艾灸干预组的杯状细胞数量和黏液分泌水平有所回升。这表明，艾灸不仅能够缓解炎症反应，还能改善肠道屏障功能，促进黏液分泌，从而保护肠道黏膜。

为了更全面地评估艾灸的治疗效果，研究者还检测了IL-10的mRNA表达水平。IL-10是一种重要的抗炎细胞因子，其表达水平的降低可能与UC的发病机制相关。然而，在本研究中，不同实验组之间IL-10的表达差异未达到统计学意义，这一结果提示在未来的实验设计中，可能需要进一步在蛋白层面进行分析，以更准确地评估IL-10的表达变化及其在治疗中的作用。

研究还涉及了实验动物的处理流程，包括麻醉、采血、结肠组织采集和处理等。实验动物在适应期后被随机分配至不同的实验组，并按照标准化流程进行处理。所有实验操作均遵循动物伦理委员会的审批，确保实验过程符合伦理规范和动物福利标准。此外，研究采用了多种检测手段，如免疫组织化学（IHC）和实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR），以评估P2X7R和NF-κB p60蛋白的表达水平以及IL-10的mRNA表达情况。这些方法为研究提供了可靠的数据支持，有助于深入理解艾灸的治疗机制。

在数据处理方面，研究者使用SPSS 23.0软件进行统计分析。对于符合正态分布的数据，采用均值±标准差表示，并通过单因素方差分析（ANOVA）进行多组间比较。若方差齐性不满足，则采用Dunnett’s T3检验。对于不符合正态分布的数据，则使用中位数及四分位数范围表示，并采用非参数Kruskal–Wallis H检验进行组间比较。所有统计检验均采用双尾检验，以显著性水平α=0.05为判断标准。

研究的局限性在于，虽然小鼠和大鼠模型在UC机制研究中具有重要价值，但它们可能无法完全模拟人类疾病的发展过程，尤其是在免疫反应方面的表现。因此，未来的研究应考虑使用更接近人类的模型，如肠道类器官或原发性活检样本，以提高研究的临床相关性。此外，虽然本研究在动物模型中验证了艾灸对P2X7R/NF-κB通路的调节作用，但这些结果仍需通过临床试验来进一步验证其在人类中的应用效果。同时，由于患者之间存在个体差异，实验结果的直接推广需谨慎对待。

综上所述，本研究揭示了P2X7R基因敲除对UC小鼠模型中肠道炎症的缓解作用，同时表明艾灸干预能够通过调控P2X7R/NF-κB通路，降低促炎因子如TNF-α和IL-6的表达水平，从而减轻肠道炎症。这些发现不仅为理解UC的发病机制提供了新的视角，也为探索艾灸作为潜在治疗手段提供了科学依据。未来的研究应进一步结合临床试验和更先进的体外模型，以验证艾灸在UC治疗中的实际应用价值，并探索其在更广泛人群中的疗效和安全性。