膳食色氨酸补充与口服负荷对家犬尿5-羟基吲哚乙酸排泄的影响：血清素代谢标志物的验证与调控机制研究

　　本研究通过验证犬尿5-HIAA（5-hydroxyindoleacetic acid）ELISA检测方法，探究膳食色氨酸（TRP）补充与口服负荷对健康犬血清素代谢标志物UH:CR（urinary 5-HIAA-to-creatinine ratio）的影响。研究发现长期TRP补充可降低个体差异并产生持续代谢调控，而短期负荷试验未引起显著急性变化，为犬慢性肠病（CE）的血清素（5-HT）代谢研究提供重要方法学基础和临床启示。

　　

引言

慢性肠病（CE）是持续超过3周的胃肠道疾病统称，在人类和伴侣动物中均有较高发病率。近年研究表明血清素（5-羟色胺，5-HT）代谢异常可能与炎症性肠病（IBD）发病机制相关。5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）作为5-HT的主要肾脏排泄代谢物，可作为血清素周转的非侵入性标志物。本研究旨在验证商用ELISA试剂盒在犬尿5-HIAA检测中的适用性，并探究膳食色氨酸（TRP）补充与口服负荷对健康犬尿5-HIAA排泄的影响。

材料与方法

尿5-HIAA检测验证

采用IBL-America公司ELISA试剂盒，对20只健康犬的尿样进行方法学验证。样品避光保存并于采集后30分钟内冷藏，酸化解冻后按1:8比例用检测缓冲液稀释以消除基质效应。通过加标回收实验（浓度范围1.5-25 mg/L）评估准确性，平行测定评估批内批间精密度。

色氨酸干预实验设计

14只健康犬（4雄10雌，体重3.7-37.2 kg）完成研究。先进行2周标准饮食过渡期（Purina Pro Plan敏感肠胃配方），采集基线尿样（T₀）。随后进行1周TRP膳食补充（Paw by Blackmores Complete Calm?按体重分级给药），采集补充后尿样（T₁）。经2周洗脱期后，进行口服TRP负荷试验：住院环境下给予双倍推荐剂量TRP，分别于给药前（T_2a）、给药后4小时（T_2b）和8小时（T_2c）采集尿样。所有尿样经酸化处理后-80°C保存，采用已验证ELISA方法检测5-HIAA浓度，并计算尿5-HIAA/肌酐比值（UH:CR）。

结果

检测方法验证

犬尿存在显著基质效应，1:8稀释可有效消除干扰。加标回收率平均132.66%，批内变异系数3.45-5.19%，批间变异系数4.61-7.27%，表明方法具有足够精密度但准确性存在系统偏高。

膳食补充效应

TRP补充一周后（T₁），UH:CR较基线（T₀）无统计学显著升高（0.970±0.639 vs 0.918±0.483 mg/mmol，p>0.05），但洗脱期后（T_2a）UH:CR显著低于T₀（p=0.025）和T₁（p=0.042）。值得注意的是，T_2a时组内变异系数较T₁明显降低，提示TRP补充可能通过反馈调节机制稳定血清素代谢。

口服负荷效应

负荷试验中，T_2a、T_2b、T_2c三个时间点UH:CR无显著差异（p>0.05）。个体响应模式存在异质性：4/14只犬在T_2b（4小时）达到峰值，8/14只犬在T_2c（8小时）达到峰值，其中5只呈持续上升趋势，3只呈现先降后升模式。

讨论

检测方法适用性

经优化稀释流程后，该ELISA试剂盒可满足犬尿5-HIAA检测需求，但132.66%的系统偏高提示需建立物种特异性标准曲线。

色氨酸代谢调控机制

膳食补充引起的持续代谢改变可能与色氨酸羟化酶（TRH-1）反馈调节有关。长期暴露于高5-HT环境可能通过下调TRH-1基因表达维持稳态，这解释了洗脱后UH:CR显著降低的现象。未标准化给药时间（餐前/餐后）可能通过影响TRP与中性氨基酸竞争吸收导致数据变异，高碳水化合物饮食可提高TRP生物利用度14%，而高蛋白饮食降低35%。

负荷试验设计优化

未观察到显著急性响应可能与剂量不足相关（25-70 mg/kg）。人类研究中80 mg/kg剂量可引发显著反应，建议后续研究使用纯L-色氨酸并进行更高剂量探索。商用补充剂中含维生素、微量元素等成分，可能通过相互作用影响TRP生物利用度。

研究局限性

缺乏盲法和随机化设计可能存在顺序效应；未进行基线血液检测无法排除亚临床疾病影响；小样本量（n=14）导致统计效能不足（4.3%），达到80%效能需每组2370只犬。

结论与展望

本研究证实犬尿5-HIAA检测需特定预处理流程，长期TRP补充可通过代谢调控机制降低个体差异，而急性负荷响应模式存在个体化特征。建议未来研究：比较CE犬与健康犬在TRP负荷试验中的5-HT代谢差异；结合CIBDAI/CCECAI临床评分系统评估临床症状相关性；采用液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术同步检测血清5-HIAA以提高准确性。TRP补充或SSRIs类药物可能成为CE犬的潜在治疗策略。