Saikosaponin A 对离体耳蜗毛细胞氧化损伤的保护作用及其机制

　　Saikosaponin A (SSA)通过激活KEAP1/NFE2通路减轻葡萄糖氧化酶（GO）诱导的氧化应激和细胞凋亡，提升HEI-OC1细胞存活率40%，降低凋亡率70%，同时降低MDA和ROS水平，上调GSH-Px、Hmox1和Sod1表达。

　　

摘要

目的

本研究旨在探讨Saikosaponin A（SSA）对小鼠耳蜗毛细胞（HEI-OC1）中氧化应激引起的损伤的保护作用及其潜在机制。

方法

通过用50 μM葡萄糖氧化酶（GO）处理HEI-OC1细胞来建立氧化应激模型。将细胞分为四组：对照组、GO组、对照组+ SSA组和GO组+ SSA（1 μM SSA）。使用CCK-8试剂检测细胞活力，通过流式细胞术以及分析BAX、BCL-2和CASPASE-3的表达来评估细胞凋亡情况。通过检测丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平来评估氧化应激程度。利用qRT-PCR检测Ptgs2（COX-2）、Nos2（iNOS）、Hmox1（HO-1）和Sod1（SOD1）的mRNA水平。通过Western blot检测KEAP1、NFE2及其磷酸化形式的蛋白质表达，包括分析其核转位情况。所有实验均独立重复三次进行。

结果

SSA使GO处理后的HEI-OC1细胞活力提高了约40%（P < 0.01），并使细胞凋亡率降低了70%（P < 0.001）。此外，SSA还降低了MDA和ROS的水平，并恢复了GSH-Px的活性（P < 0.01）。同时，SSA下调了Ptgs2和Nos2的表达，上调了Hmox1和Sod1的表达。在蛋白质水平上，SSA抑制了KEAP1的表达，增强了NFE2及其磷酸化形式的水平，并促进了NFE2向细胞核的转位。

结论

SSA通过激活KEAP1/NFE2信号通路，减轻了GO诱导的HEI-OC1细胞的氧化应激和细胞凋亡。这些发现支持SSA在保护耳蜗毛细胞免受氧化损伤方面的潜在应用，值得进一步进行体内研究。