刚果民主共和国人类非洲锥虫病的被动监测：临床表现以及对快速诊断方法和参考实验室检测准确性的前瞻性评估

《PLOS Pathogens》：Passive surveillance of human African trypanosomiasis in the Democratic Republic of the Congo: clinical presentation and prospective evaluation of rapid diagnostic and reference laboratory test accuracy

　　被动筛查中HAT快速诊断试验及参考实验室检测性能评估：刚果（金）研究显示HAT Sero K-SeT敏感性达100%但特异性仅93.9%，分子检测（LAMP、m18S、TgsGp qPCR）灵敏度分别为63.6%、39.4%、18.2%，临床特征如睡眠障碍、淋巴结肿大显著关联于感染

　　这项研究聚焦于人类非洲锥虫病（HAT）的诊断方法，尤其是在刚果民主共和国（DR Congo）进行的被动筛查中。HAT是一种由布氏冈比亚锥虫（Trypanosoma brucei gambiense）引起的热带传染病，主要流行于西非和中非地区。由于其病程的非特异性表现，早期诊断面临挑战，因此快速诊断测试（RDT）成为提高诊断效率的重要工具。然而，目前市面上的RDTs的敏感性和特异性尚未得到充分的前瞻性评估，尤其是在偏远地区的应用中。因此，研究者对三种HAT RDTs（HAT Sero K-SeT、SD Bioline HAT和rHAT Sero-Strip）以及几种远程参考实验室检测方法（如试盐溶解、间接ELISA、环形等温扩增技术LAMP和m18S与TgsGp定量PCR）进行了全面评估，以探讨其在实际筛查中的诊断效能。

研究选取了DR Congo的29个健康机构，时间跨度从2017年10月至2020年12月。共招募了3725名疑似患者，但最终有612人因数据缺失、不符合纳入标准或缺乏寄生虫学确认而被排除，导致实际分析人数为3113人。研究发现，尽管HAT在该地区的流行率已显著下降，但仍有约1.35%的参与者被确认为HAT患者。研究者通过寄生虫学检测作为金标准，评估了这些RDTs和远程参考实验室测试的性能。

从临床症状与HAT的关系来看，研究发现一些特定的症状与HAT存在显著关联。例如，睡眠障碍、淋巴结肿大、精神问题、反复发热且对抗疟疾药物无反应以及运动障碍等，均显示出较高的HAT患病风险。通过逻辑回归分析，这些症状的敏感性被证实达到83.3%（95% CI 69.4-91.7%），而特异性仅为72.3%（95% CI 70.7-73.9%）。这表明，虽然这些症状有助于识别HAT患者，但其特异性较低，可能产生较多的假阳性结果。因此，研究者建议在临床筛查中应优先考虑具有较高特异性的症状组合，以减少不必要的进一步检查和治疗。

在RDTs的诊断性能方面，HAT Sero K-SeT表现出100%的敏感性，这符合世界卫生组织（WHO）设定的靶向产品文件（TPP）中对理想筛查测试的敏感性要求（>99%）。然而，其特异性仅为93.9%（95% CI 92.9-94.6%），略低于WHO设定的最低可接受标准（>95%）。相比之下，SD Bioline HAT和rHAT Sero-Strip RDTs的特异性在本研究中并未达到理想水平，但这两个测试目前已不再商业化。因此，HAT Sero K-SeT仍然是当前唯一可用的RDTs之一，其在实际应用中具有一定的优势，但也存在局限性。

对于远程参考实验室测试，研究者发现试盐溶解和间接ELISA/T.b. gambiense在DBS（干血斑）样本上的敏感性分别为93.9%和84.9%，而特异性分别为93.9%和91.6%。相比之下，LAMP、m18S和TgsGp定量PCR的敏感性较低，分别为63.6%、39.4%和18.2%，而特异性分别为75.6%、92.2%和98.3%。这表明，尽管这些分子检测方法在特异性方面表现良好，但它们的敏感性仍然不足，尤其是在处理DBS样本时，可能会漏检部分真正的HAT患者。因此，研究者强调需要进一步优化这些分子检测方法，以提高其在远程筛查中的实用性。

值得注意的是，尽管HAT Sero K-SeT的敏感性理想，但其特异性略低于WHO设定的标准，这可能导致一些非HAT患者被误诊为HAT阳性，从而引发不必要的治疗。这在“筛查与治疗”（screen and treat）策略中尤为关键，因为该策略旨在通过快速诊断和广泛治疗来加速HAT的消除。然而，如果RDTs的特异性不足，可能会导致误诊率上升，增加医疗资源的浪费和患者负担。因此，研究者建议在实际应用中，结合临床症状和多种检测方法，以提高诊断的准确性。

此外，研究还指出，尽管远程参考实验室测试的敏感性较低，但所有HAT患者的DBS样本在至少一项测试中均呈阳性（100%敏感性），而通过将免疫学和分子学检测结果进行并行或串联组合，可以显著提高特异性。例如，串联至少一项免疫学和一项分子学测试的特异性达到了97.2%（95% CI 93.6-98.8%），这表明在需要高特异性的场景下，这种组合方法可能更有效。然而，对于敏感性要求较高的情况，仍需依赖HAT Sero K-SeT等高敏感性测试。

研究还揭示了一些挑战，包括偏远地区健康机构的物流问题、人员培训不足以及临床症状评估的主观性。这些问题可能导致部分患者未能完成完整的诊断流程，从而影响研究结果的准确性。例如，约29.1%的RDT阳性患者未能进行寄生虫学确认，这可能是因为缺乏足够的确认能力，或者患者未能到达参考实验室。这些因素表明，建立完善的诊断网络和加强远程测试的标准化对于提高HAT的诊断率至关重要。

在实际应用中，HAT的诊断不仅依赖于RDTs，还需要结合临床症状和进一步的实验室检测。例如，试盐溶解和间接ELISA/T.b. gambiense作为免疫学检测方法，已经在多个研究中显示出较高的特异性，但它们的敏感性在DBS样本上仍存在不足。因此，这些方法更适合用于确认疑似病例，而不是作为初步筛查工具。另一方面，LAMP、m18S和TgsGp定量PCR等分子检测方法虽然具有较高的特异性，但敏感性较低，无法单独用于筛查，需要与其他方法结合使用。

研究结果还与之前在几内亚和科特迪瓦的类似研究相呼应，表明HAT RDTs和远程参考实验室测试的性能在不同地区可能存在一定的差异。这提示我们需要更多的数据来评估这些方法在不同流行背景下的适用性。同时，研究者建议未来应开发新的分子检测技术，例如使用RNA和DNA稳定缓冲液的新型存储系统，以及能够提高敏感性的RT-qPCR方法，以支持更有效的远程筛查。

总体而言，本研究为HAT的诊断提供了重要的实证数据，尤其是在被动筛查中的应用。尽管HAT Sero K-SeT的敏感性理想，但其特异性仍需进一步优化。此外，远程参考实验室测试的性能也表明，需要加强这些方法的标准化和评估，以确保其在HAT消除进程中的可靠性。通过结合临床症状和多种检测方法，可以更有效地识别HAT患者，减少误诊和漏诊的风险，从而支持更精准的诊断和治疗策略。