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南开大学陈凌懿教授发表CRISPR新成果
生物通报道:利用抗生素进行筛选,是分子克隆的一个关键步骤。日前,南开大学的研究者们以CRISPR/Cas技术为基础,开发了一个重复利用抗生素抗性的简单筛选方法,这一方法非常适用于多步骤的基因工程改造。对于一个分子生物学实验室来说,抗生素抗性基因几乎是不可或缺的。虽然这些基因是鉴定正确克隆的有力工具,但抗生素抗性基因有数量限制,束缚了人们进行复杂基因工程改造的能力。南开大学生命科学学院的陈凌懿教授在四月份的BioTechniques杂志上发表文章,描述了一个在几轮克隆中重复进行一种抗生素筛选的简单方案。这一技术将为哺乳动物细胞的基因工程改造带来可喜改变。去除抗生素抗性基因,就可以在进一步基因改造
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华人学者获得首个CRISPR专利 免费使用或受阻
生物通报道:来自the Scientist的消息,著名的Broad研究院4月15日宣布,他们获得了第一份热门基因组编辑技术:CRISPR/Cas9 的专利。近年来CRISPR/Cas9 技术方法在全球各大实验室中得到了认可,许多研究人员采用这一技术完成了不少研究领域的项目,但是随着这一专利的颁发,未来要使用这种技术,也许需先申请,而某些研究团队也可以通过这一技术获利。获得这一最新专利的是著名的Broad研究所,作为麻省理工学院和哈佛大学共同拥有的一个研究合作中心,在成立后短短几年里就取得了不少与主要疾病相关的遗传研究重大成果。而这一CRISPR/Cas9 专利的归属权就是Broad研究所,CR
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Nature:北大魏文胜开发出新型CRISPR/Cas 9 sgRNA文库
探索基因及其表达的蛋白在特定生理、病理、发育等过程中所起的作用一直是生命科学领域研究的重要内容。尽管利用RNA干扰鉴定高等生物基因功能的技术已经普及,但是这种方法经常伴随脱靶现象;而且由于只能部分抑制基因表达,往往不足以造成表型变化从而影响对其基因型的判断。近几年基因编辑技术的出现,使得对单一基因进行修饰的遗传手段得到迅速发展,然而在哺乳细胞内基于基因完全敲除进行大规模功能性筛选的方法依然空缺。生命科学学院魏文胜课题组为此开发了一种基于CRISPR/Cas9系统的慢病毒聚焦型人源细胞文库、功能性基因筛选平台以及基于高通量深度测序技术解析数据的完整技术路线。利用这一高效的新型遗传筛选技术,成功鉴
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北京大学Nature发布CRISPR研究重要成果
生物通报道 来自北京大学的研究人员开发出了一个新型的CRISPR/Cas9 sgRNA文库,提出了一种基于sgRNA文库功能筛查和高通量测序分析的基因鉴别新方法。这些重要的研究成果在线发表在4月9日的《自然》(Nature)杂志上。论文的通讯作者是北京大学生命科学学院的魏文胜(Wensheng Wei)研究员。其主要研究领域包括病原微生物感染分子机理,发展宿主导向的对抗病原微生物感染的治疗方法,以及肿瘤细胞转移的分子机制研究(BAMBANKER细胞冻存液 免费试用装火热申请中)。近年来基因组编辑领域取得飞速的发展,锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)、
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科学家培育出世界首对基因编辑猴
近日,《细胞》杂志网站报道,全球首对靶向基因编辑猴在中国出生,完成这一工作的科学家来自南京医科大学生殖医学国家重点实验室、云南省灵长类生物医药研究重点实验室和南京大学。猴子属灵长类动物,猴基因编辑的成功将有助于建立猴疾病模型,更好地模拟人类疾病,大大降低药物研究的风险。未来有望定向改造人类基因,治疗基因疾病。 研究人员采用的是最新基因编辑技术Crispr,可以对目标DNA进行插入、删除或重写,类似计算机编辑文字一样对物种基因进行编辑,而且成功率较高。这次中国科学家的研究证明,不仅可以利用Crispr技术高效精确地编辑灵长类基因、,还能培育出个体。 科学家首先给猴胚胎细胞注射
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Nature子刊发布CRISPR研究新突破
生物通报道 利用一种基于细菌蛋白的新基因编辑系统,麻省理工学院的研究人员治愈了因单一遗传突变致罹患一种罕见肝病的小鼠。这些发表在3月30日《自然生物技术》(Nature Biotechnology)杂志上的研究结果,提供了首个证据证实,称之为CRISPR的基因编辑技术可以逆转活体动物的疾病症状。该研究小组表示,CRISPR为剪除突变DNA,以正确的序列取而代之提供了一条简单的途经,有潜力用于治疗许多的遗传疾病。论文的资深作者、麻省理工学院化学工程学系副教授、Koch综合癌症研究所成员Daniel Anderson说:“这种方法的令人兴奋之处在于,我们现在可以在活体成年动物体内纠正缺
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Nature子刊:黄行许教授解决基因组编辑的脱靶问题
生物通报道:规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与内切酶Cas9的组合,原本是细菌抵御病毒的重要武器,现在这一组合已经成为了一个通用工具,被用于在真核生物中进行位点特异性的基因组修饰。引导RNA(sgRNA)是一段与目标DNA片段匹配的短RNA,它负责指导CRISPR-Cas9的DNA剪切活性。人们发现,引入多个sgRNA可以同时修饰多个基因。CRISPR-Cas9在基因工程领域拥有巨大的应用潜力,吸引了众多科学家的注意。然而最近有研究显示,在体外培养的细胞中,CRISPR-Cas9会在相关位点引入不容忽视的脱靶突变。如果DNA片段与目标片段的差异在五个核苷酸以下,就会出现脱靶效应。这一问题大
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全球首对靶向基因编辑猴在中国出生
全球首对靶向基因编辑猴近日在中国出生。研究专家指出,猴基因编辑的成功将有助于建立猴疾病模型,更好地模拟人类疾病,大大降低药物研究的风险。相关研究论文日前在线发表在《细胞》杂志上。 该研究由南京医科大学生殖医学国家重点实验室、云南省灵长类生物医药研究重点实验室和南京大学等联合完成。研究人员首先给猴胚胎细胞注射定制的RNA,将“编辑工具”——DNA切割酶Cas9引导至期望的突变位点,引导修改3个基因:一个是调节代谢的基因Ppar-γ,另一个是调节免疫功能的基因Rag1,第三个是调节干细胞和性别决定的基因。研究人员在180多个单细胞期猴胚胎中同时靶向编辑了这3个基因。在对15个胚胎的基因组DNA进行
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著名学者朱健康教授PNAS发表CRISPR新研究成果
生物通报道 来自中国科学院上海生命科学研究院的研究人员在拟南芥中,对CRISPR/ Cas系统诱导的基因修饰的遗传度、特异性及模式进行了多代分析,研究结果发表在《美国科学院院刊》(PNAS)上。文章的通讯作者是中科院上海生命科学研究院的朱健康(Jian-Kang Zhu)教授,朱教授是植物抗逆生物学领域世界级领军人物之一,其及其领导的实验室在植物抗旱、抗盐与耐低温方面的研究硕果累累,在国内外享有声誉。是首批“****”入选者,现为美国普渡大学生物化学系和园艺及园林系杰出教授,2010年当选为美国国家科学院院士。CRISPR(成簇的规律间隔短回文重复序列,clustered regu
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中国学者Cell stem cell基因编辑突破性成果
生物通报道 继近日中国的科学家们采用CRISPR/Cas9方法成功构建出第一批携带定向突变的基因工程猴之后(延伸阅读:中国科学家Cell发布靶向基因编辑里程碑成果),来自云南省灵长类生物医学重点实验室、同济大学医学院等处的研究人员在2月13日的《细胞干细胞》(Cell Stem Cell)杂志上发表研究论文称,通过一种叫做转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)的基因编辑技术,获得了出生即携带MECP2基因突变的雌性石蟹猴,这是采用TALENs技术构建出的首个非人类灵长类动物模型。云南省灵长类生物医学重点实验室的季维智( Weizhi Ji )研究员、同济大学医学院的孙毅(Yi
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TALEN和CRISPR/Cas9技术被《Nature methods》评为2014年值得关注技术,CRISPR/Cas9技术的脱靶引起了关注
在2014年《Nature methods》首刊中,作为最新的基因组编辑技术,TALEN和CRISPR/Cas9技术都被列为2014年值得关注的技术。文中指出,一方面TALEN不仅用于普通的基因修饰,还可将成熟的TALE用于修饰表观基因组,另一方面也明确指出,CRISPR/Cas9脱靶现象一直是科学家们关注但无法从根本上消除的缺陷,这一缺陷的存在使得CRISPR/Cas9在临床应用和科学研究中都受到很大局限。TALEN作为成熟的基因修饰技术通过长度为40bp左右的识别序列定位目标基因,在特异位点修饰靶基因,已有文章证实TALEN不存在脱靶现象,现已成功应用于基因敲除、基因敲入、定点突变、mic
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CRISPR研究先锋张锋博士Cell发表最新成果
生物通报道 来自Broad研究所和麻省理工学院的研究人员与东京大学的同事们联手,生成了CRISPR-Cas 系统的关键组成部分——Cas9复合体的第一张高分辨率图像。近年来科学家们开始利用Cas9复合体作为一种基因组编辑工具来沉默基因,探究细胞生物学。这些发表在本周《细胞》(Cell)杂志上的研究成果,有望帮助研究人员改良及进一步操控这一工具加速基因组研究,使得这一技术更加接近应用于人类遗传疾病治疗。于1987年在细菌中首次被发现,直到近期CRISPR(成簇的规律间隔短回文重复序列,clustered regularly interspaced short palindromic
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Science解析热点基因组编辑工具
生物通报道:近来,Cas9酶作为一种有力的新基因组编辑工具,引起了人们极大的研究热情。现在加州大学伯克利分校的研究人员,首次成像了这种酶的精细三维结构,这一成果无疑会进一步提高Cas9的应用价值。文章于二月六日发表在Science杂志上。加州大学的生化学家Jennifer Doudna和生物物理学家Eva Nogales领导研究团队,使用X射线晶体衍射技术,获得了两种主要Cas9酶的晶体结构,分辨率达到了2.6和2.2 Å。随后研究团队通过单颗粒电镜向人们展示了,Cas9搭档引导RNA与目标DNA相互作用的机制。这一结果可以帮助人们对Cas9酶进行改良,使其更适合基础研究和基因工程
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Nature子刊:为基因组编辑保真
生物通报道:有时生物学很残酷,在健康和致命疾病之间,往往只有一个遗传密码的差异。尽管人们一直在研究这些微小改变引发的疾病,但在人类干细胞中对其进行重现依然颇具挑战。现在,Gladstone研究所的科学家们开发了一个新技术,能够帮助人们对人类基因组进行有效的单碱基编辑,文章发表在近期的Nature Methods杂志上。这一技术不仅能增强人们在干细胞中模拟疾病的能力,也为修改遗传密码进行治疗奠定了基础。目前,研究界和医药领域面临着一个最为紧迫的问题:如何准确有效地捕获罕见致病突变,以及怎样对其进行修正。而Bruce Conklin领导的这项研究为人们提供了一个解决方案。“随着遗传学技术的进步,人
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中国科学家Cell发布靶向基因编辑里程碑成果
生物通报道 精确基因编辑技术的终极潜能开始得以实现。来自中国的研究人员报告称获得了第一批携带定向突变的基因工程猴,这一里程碑成果有可能为构建出更现实的人类疾病研究模型提供了一个垫脚石。相关论文发表在1月30日的《细胞》(Cell)杂志上。来自南京大学模式动物研究所的黄行许(Xingxu Huang)博士、南京医科大学的沙家豪(Jiahao Sha)教授、云南省灵长类生物医学重点实验室季维智( Weizhi Ji )及其同事们,成功地利用CRISPR/Cas9系统对孪生的食蟹猴进行了精确的基因修饰。在过去的一年里CRISPR/Cas9技术如暴风般横扫整个基因工程领域,研究人员已利用这
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Nature子刊:巧解基因编辑脱靶问题
生物通报道:科学家们发现,只需要对一种强力基因编辑工具作一个简单的改动,就能大大提高它的特异性。在合成蛋白CRISPR-Cas RNA引导性核酸酶(RNA-guided nucleases,RGNs)中,引导性RNA(gRNA)是一个重要的组分。麻省总医院(MGH)的研究人员发现,对gRNA的长度稍加调整,就能大幅减少预定目标之外的DNA突变。文章于一月二十六日发表在Nature Biotechnology杂志上。该研究团队去年刚刚发表文章,指出了CRISPR-Cas技术可能存在的脱靶问题。(Nature子刊:强大基因编辑工具可引起脱靶突变)“我们只是简单截短了gRNA靶标区域的长度,结果发现
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中科院李劲松实验室在Cell Stem Cell发文章揭示CRISPR/Cas9存在脱靶效应
中科院生化细胞所李劲松实验室利用CRISPR/Cas9技术对引起小鼠白内障遗传疾病的Crygc基因进行了研究,打靶的小鼠可以通过生殖细胞将修复的Crygc基因传递到下一代,因此由CRISPR/Cas9技术介导的遗传疾病治疗研究为人类基因治疗提供了一条新的思路。但是,李劲松实验室发现CRISPR/Cas9有严重脱靶现象,分别表现在以下两个方面:一方面,在Crygc突变位置(与野生型基因相比,缺失一个碱基)共设计5条sgRNA并打靶发现,有2条sgRNA可以有效地切割野生型位点,显示CRISPR/Cas9在此处有40%的脱靶率;另一方面,研究人员为了检测脱靶另做了120个PCR和测序发现,确实有脱
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CRISPR/Cas9入选2013《科学》杂志十大进展,仍难摆脱脱靶困扰
2013年,研究者们发表多篇文章介绍CRISPR/Cas9系统,但是CRISPR/Cas9目前仍存在一个很严重且无法避免的问题,即潜在的脱靶效应不可消除。CRISPR/Cas9是由DNA切割酶Cas9和一段与靶 DNA片段匹配的20个核苷酸长度的短 RNA片段构成。它的特点在于只需合成一个gRNA就能实现对基因的特异性修饰,Cas9蛋白不具特异性;编码gRNA的序列不超过100bp,因此构建较简单方便。但是CRISPR/Cas9与靶位点识别的特异性主要依赖于gRNA与靠近PAM处10-12bp碱基的配对,而其余远离PAM处8-10bp碱基的错配对靶位点的识别影响不大。麻省理工的张峰等曾证实,在
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中国学者综述:基因组编辑技术及其在昆虫研究中的应用
生物通“核心刊物”迎来了新期刊:科学通报,中国科学C辑:生命科学,这两份期刊均是由中国科学院和国家自然科学基金委员会共同主办的,我国学术期刊中的知名品牌,被国内外各主要检索系统收录,如国内的《中国科学论文与引文数据库》(CSTPCD)、《中国科学引文数据库》(CSCD)等;美国的SCI、CA、EI,英国的SA,日本的《科技文献速报》等。目前针对每期的重点内容,生物通将展开详细推荐,欢迎读者共同参与……生物通报道:基因组编辑技术是进行功能基因组研究的重要工具。锌指核酸酶技术(ZFNs)、类转录激活因子核酸酶技术(TALENs)以及CRISPR/Cas技术是近年来发展起来的3种主流基因组编辑技术。
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Nature子刊重要成果:构建小鼠基因组CRISPR导向RNAs文库
生物通报道 研究人员开发出一种方法,构建出了一个可诱导小鼠基因组全基因靶向突变的CRISPR导向RNA(gRNAs)综合文库。人们可利用这一文库来调查不同细胞类型中每个基因的作用。这一突破性的研究成果在线发表在12月23日的《自然生物技术》(Nature Biotechnology)杂志上。CRISPR技术是指利用一段与靶序列相同的导向RNA来引导Cas9核酸酶对特异性靶向DNA进行识别和切割,造成DNA的双链或单链断裂。然后,细胞会利用自身具备的两种DNA复制机制:即非同源性末端结合(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源介导的修复(Homolo